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上海帛科生物技術(shù)有限公司
   
     
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牛呼腸孤病毒探針法熒光定量RT-PCR試劑盒
  • 品牌:帛科
  • 產(chǎn)地:進(jìn)口、國產(chǎn)
  • 貨號(hào):BK-P64713
  • 價(jià)格: ¥3800/盒
  • 發(fā)布日期: 2020-07-08
  • 更新日期: 2025-01-10
產(chǎn)品詳請
產(chǎn)地 進(jìn)口、國產(chǎn)
品牌 帛科
貨號(hào) BK-P64713
用途 公司產(chǎn)品僅用于科研
包裝規(guī)格 50次
純度 %
CAS編號(hào)
是否進(jìn)口

公司產(chǎn)品僅用于科研實(shí)驗(yàn)方法步驟:
方法
1
:在冰浴中,按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。 
10×PCR buffer 
5 μl     dNTP mix
2mM 
4 μl     
引物110pM 
2 μl     
引物210pM 
2 μl     Taq
酶 (2U/μl 
1 μl     DNA
模板(50ng-1μg/μl 
1 μl     
ddH2O 50 μl 

本產(chǎn)品只適用于科研,不能用于臨床診斷。

產(chǎn)品名稱

規(guī)格

貨號(hào)

牛呼腸孤病毒探針法熒光定量RT-PCR試劑盒

50

BK-P64713

PCR實(shí)驗(yàn)步驟:
取凍存已裂解的細(xì)胞,室溫放置5分鐘使其完全溶解。
兩相分離 每1mlTRIZOL試劑裂解的樣品中加入0.2mllvfang,蓋緊管蓋。手動(dòng)劇烈振蕩管體15秒后,1530℃孵育23分鐘。4℃12000rpm離心15分鐘。離心后混合液體將分為下層的紅色酚lvfang相,中間層以及無色水相上層。RNA全部被分配于水相中。水相上層的體積大約是勻漿時(shí)加入的TRIZOL試劑的60%。
③RNA
沉淀 將水相上層轉(zhuǎn)移到一干凈無RNA酶的離心管中。加等體積異丙醇混合以沉淀其中的RNA,混勻后1530℃孵育10分鐘后,于4℃12000rpm 離心10分鐘。此時(shí)離心前不可見的RNA沉淀將在管底部和側(cè)壁上形成膠狀沉淀塊。
④RNA
清洗 移去上清液,每1mlTRIZOL試劑裂解的樣品中加入至少1ml75%乙醇(75%乙醇用DEPCH2O配制),清洗RNA沉淀?;靹蚝?,4℃7000rpm離心5分鐘。
⑤RNA
干燥 小心吸去大部分乙醇溶液,使RNA沉淀在室溫空氣中干燥5-10分鐘。
溶解RNA沉淀 溶解RNA時(shí),先加入無RNA酶的水40μl用槍反復(fù)吹打幾次,使其完全溶解,獲得的RNA溶液保存于-80℃待用。 1)紫外吸收法測定先用稀釋用的TE溶液將分光光度計(jì)調(diào)零。然后取少量RNA溶液用TE稀釋(1:100)后,讀取其在分光光度計(jì)260nm280nm處的吸收值,測定RNA溶液 濃度和純度。
公司產(chǎn)品僅用于科研使用方法:
一、樣品采集:
1
、食品樣品:樣品的采集與預(yù)培養(yǎng)按照樣品的采集與預(yù)培養(yǎng)按照菌檢驗(yàn)要求進(jìn)行。
2
、血液樣品:用無菌注射器抽取受檢者血2mL,注入無菌EDTA2Na(或檸檬酸鈉)抗凝管,立即混勻。
3
、糞便樣品:取糞便置于滅菌的收集管中送檢。
4
、病灶部位樣品:取部位新鮮滲出物、粘液膿血送檢。
一、稀釋 PCR 陽性對照(以 10E2-10E7 拷貝/μL 6 個(gè) 10 倍稀釋度為例)
1.
注意:由于標(biāo)準(zhǔn)品濃度非常高,因此下列稀釋操作一定要在獨(dú)立的區(qū)域進(jìn)行,千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分)。為增加產(chǎn)品穩(wěn)定性和避免擴(kuò)散病原,本產(chǎn)品不提供活體樣品做陽性對照,只提供可以直接使用的 DNA 片段作為陽性對照。
2.
標(biāo)記 6 個(gè)離心管,分別為 76,5,4,3,2。
3.
用帶芯槍頭分別加入 45 μL 熒光 PCR 專用模板稀釋液(用帶芯槍頭,下同)。
4.
7 號(hào)管中加入 5 μL 1×10E8 拷貝/μL 的陽性對照,充分震蕩 1 分鐘,得1×10E7 拷貝/μL 的陽性對照。放冰上待用。
5.
換槍頭,在 6 號(hào)管中加入 5 μL 1×10E7 拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得),充分震蕩 1 分鐘,得 1×10E6 拷貝/μL 的陽性對照。放冰上待用
6.
換槍頭,在 5 號(hào)管中加入 5 μL 1×10E6 拷貝/μL 的陽性對照到 5 號(hào)管中,充分震蕩 1 分鐘,得 1×10E5 拷貝/μL 的陽性對照。放冰上待用。
7.
重復(fù)上面的操作直到得到 6 個(gè)稀釋度的陽性對照。放冰上待用。

實(shí)驗(yàn)注意事項(xiàng):
1
RT-PCR可以檢測組織、細(xì)胞、血液、細(xì)菌等很多材料,不同的樣本有不同要求,實(shí)驗(yàn)前請充分溝通確認(rèn)實(shí)驗(yàn)方案和樣本情況;
2
)客戶盡可能提供實(shí)驗(yàn)的背景信息、物種、基因準(zhǔn)確的名稱和ID號(hào);
3
)客戶盡量不要提供DNARNA樣品。
4
)樣本保存于液氮或干冰,也可以保存于Trizol液中。
實(shí)時(shí)熒光定量PCRquantitative real-time PCR,qPCR)是指在PCR反應(yīng)體系中加入熒光基團(tuán),利用熒光信號(hào)積累實(shí)時(shí)監(jiān)測整個(gè)PCR進(jìn)程,*通過標(biāo)準(zhǔn)曲線對未知模板進(jìn)行定量分析的方法。實(shí)時(shí)熒光定量PCR的化學(xué)原理包括探針類和非探針類兩類,探針類是利用與靶細(xì)胞序列特異性雜交的探針來指示擴(kuò)增產(chǎn)物的增加,非探針類是利用熒光染料或者特異性設(shè)計(jì)的引物來指示擴(kuò)增的增加。運(yùn)用該技術(shù)可以對DNA、RNA樣品進(jìn)行定量(包括*定量和相對定量)和定性分析。
主要服務(wù):DNARNA*定量分析、基因表達(dá)差異分析、基因分型。
主要技術(shù):引物設(shè)計(jì)、RNA提取、cDNA合成、qPCR

CL-0012A172(人腦細(xì)胞)5×106cells/瓶×2N-叔丁氧羰基-D-亮酸,英文名或英文縮寫:BOC-D-Leucine,級別:BR,98%,規(guī)格:5

ART3 Others Human 人 ART3 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) β-羥脫氫酶 β-Hydroxybutyrate Dehydrogenase (20... 9028-38-0 10UN 通用試劑

心肌細(xì)胞生長添加物CMGS-d2 FORMcLDqHYDq-D2 1664-98-8

ISK (Ishikawa)細(xì)胞,人內(nèi)膜癌細(xì)胞 小鼠小細(xì)胞,Bv-2細(xì)胞 心肌成纖維細(xì)胞Many types of cells包裝:5 × 105(1ml)Enrofloxacin諾沙星500KUI型,95%

GH3(大鼠細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2125572-95-4反式-12-環(huán)己四乙酸TRANS-1,2-DIAMINOCYCLOHEXANE-N,N,N',N'-TETRAACETIC ACID MONOHYDRATE
表皮角質(zhì)細(xì)胞cDNAHEK cDNA培美曲塞-15N,13C5Pemetrexed - Labeled 15N,13C5質(zhì)量規(guī)格:美國進(jìn)口

RPE Others Mouse 小鼠 RPE / RPE2-1 細(xì)胞裂解液 (陽性對照) N-硝基-L-精氨酸甲酯N'-Nitro-L-arginine-methyl ester 質(zhì)量規(guī)格:>98%

脂肪細(xì)胞完全培養(yǎng)基 100mLN-苯甲酰-L-酪氨酸乙酯(BTEE)N-Benzoyl-L-tyrosine ethyl ester質(zhì)量規(guī)格:>98%

ZA1細(xì)胞,轉(zhuǎn)S9基因倉鼠卵巢細(xì)胞 PC-12未分化(大鼠腎上腺嗜鉻細(xì)胞瘤) 中國倉鼠肺細(xì)胞;R 1610 [R1610]AEBSF絲氨酸抑制劑AEBSF HCl質(zhì)量規(guī)格:>98%,BR

EFNA2 Protein Mouse 重組小鼠 Ephrin-A2 / EFNA2 蛋白AEBSF(進(jìn)分)AEBSF HCl質(zhì)量規(guī)格:>97%,進(jìn)分TCI A2215
小鼠誘導(dǎo)性多潛能干細(xì)胞;PUMC-mips-B2酸性紫49Acid Violet 49質(zhì)量規(guī)格:IND,進(jìn)分

HGF Others Mouse 小鼠 HGF / Hepatocyte Growth Factor 細(xì)胞裂解液 (陽性對照) 皂黃Metanil yellow質(zhì)量規(guī)格:AR

原代心肌細(xì)胞特制無血清添加劑Many types of cells包裝:1ml橙黃G;酸性橙10Orange G質(zhì)量規(guī)格:BS

HUVEC(原代)細(xì)胞,臍內(nèi)皮細(xì)胞 HPVl6 E6、E7ras基因共轉(zhuǎn)化的C57BL/C(H-2b)小鼠肺上皮細(xì)胞,TC-1細(xì)胞 雪旺細(xì)胞總RNAHSC NA橙黃ⅡOrangeⅡ質(zhì)量規(guī)格:AR

QGY-7703(細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2柯衣定Chrysoidin質(zhì)量規(guī)格:AR
HEp-2細(xì)胞,喉表皮樣癌細(xì)胞 人食管鱗癌,KYSE70細(xì)胞 中國倉鼠卵巢細(xì)胞K1(亞系克隆);CHO-K1丹曲林鈉半七水合物Dantrolene,  Salt Hemiheptahydrate質(zhì)量規(guī)格:美國進(jìn)口

tTA基因修飾的小鼠(B);F9-CAG-tTA-1A33-甲氧基地氯雷他定3-Methoxy Desloratadine質(zhì)量規(guī)格:美國進(jìn)口

HA Others H1N1 甲型 H1N1 (A/California/04/2009) 血凝素HA1 (Hemagglutinin) 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) 異地氯雷他定Iso Desloratadine質(zhì)量規(guī)格:美國進(jìn)口

牛呼腸孤病毒探針法熒光定量RT-PCR試劑盒人晶體上皮細(xì)胞永生系;SRA01/04(HLE)N-甲基地氯雷他定N-Methyl Desloratadine質(zhì)量規(guī)格:美國進(jìn)口

人食道平滑肌細(xì)胞 (HESMC)( 5×105 )5-羥基地氯雷他定5-Hydroxy Desloratadine質(zhì)量規(guī)格:美國進(jìn)口

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