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上海帛科生物技術(shù)有限公司
   
     
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乳腺成纖維細(xì)胞
  • 品牌:帛科
  • 產(chǎn)地:進(jìn)口、國產(chǎn)
  • 貨號(hào):E1378
  • 價(jià)格: ¥1700/株
  • 發(fā)布日期: 2020-10-19
  • 更新日期: 2024-12-26
產(chǎn)品詳請
產(chǎn)地 進(jìn)口、國產(chǎn)
保存條件 低溫冷藏
品牌 帛科
貨號(hào) E1378
用途 公司產(chǎn)品僅用于科研
組織來源
細(xì)胞形態(tài) 詳見說明書
是否是腫瘤細(xì)胞
CAS編號(hào)
保質(zhì)期 詳見說明書
器官來源 詳見說明書
免疫類型 詳見說明書
品系 詳見說明書
生長狀態(tài)
物種來源
包裝規(guī)格
純度 詳見說明書%
是否進(jìn)口

帛科細(xì)胞培養(yǎng)器材的選擇:從培養(yǎng)量大小來講,從小到大有細(xì)胞培養(yǎng)板、細(xì)胞反應(yīng)管、搖瓶、細(xì)胞培養(yǎng)瓶、細(xì)胞工廠等,更大就是反應(yīng)器了。

產(chǎn)品名稱

規(guī)格

貨號(hào)

乳腺成纖維細(xì)胞


E1378

產(chǎn)品簡稱:乳腺成纖維細(xì)胞
產(chǎn)品名稱:乳腺成纖維細(xì)胞

規(guī)格:瓶

貨號(hào):E1378

帛科細(xì)胞培養(yǎng)瓶培養(yǎng)面積從25-225平方厘米不等,一般都經(jīng)過表面改性處理,適合細(xì)胞貼壁和生長。225ml 175ml的多用于大規(guī)模培養(yǎng)時(shí)用(如單克隆細(xì)胞的培養(yǎng)等),75ml的多用于一般性細(xì)胞實(shí)驗(yàn)用(一般性的傳代,保存細(xì)胞,為實(shí)驗(yàn)提供細(xì)胞等),25ml一般是用來復(fù)蘇細(xì)胞或細(xì)胞較少時(shí)的培養(yǎng),還有做原代細(xì)胞時(shí)也可以做多瓶而避免交叉污染。產(chǎn)品僅用于科研
細(xì)胞培養(yǎng)的具體步驟和注意事項(xiàng):
1.細(xì)胞復(fù)蘇
將凍存細(xì)胞從液氮中取出后,在37水浴鍋內(nèi)不斷搖動(dòng)促進(jìn)其融化。將融化的細(xì)胞移入離心管中,加入37oC預(yù)熱的DMEM完全培養(yǎng)基中(其中胎牛血清約為10%),輕輕吹勻,離心,500g離心2min,棄上清液。
加入DMEM完全培養(yǎng)基清洗,棄上清液。加入DMEM完全培養(yǎng)基,輕輕吹打混勻,制成細(xì)胞懸液,接種于培養(yǎng)皿/瓶中,在含5% CO2的細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。
2.
細(xì)胞傳代
帛科細(xì)胞密度達(dá)到80%~90%(過量不足,過晚細(xì)胞狀態(tài)不佳,1:21:10以上的比率傳代培養(yǎng),一般1:31:5細(xì)胞一代,即從細(xì)胞接種到分離再培養(yǎng)的一段時(shí)間,非細(xì)胞有絲分裂次數(shù))時(shí),去掉完全培養(yǎng)基,用1X PBS清洗2次。
加入胰蛋白酶(注意:消化液的量以蓋住細(xì)胞*,*消化溫度是37oC。顯微鏡下觀察細(xì)胞:倒置顯微鏡下觀察消化細(xì)胞,若胞質(zhì)回縮,細(xì)胞之間不再連接成片,表明此時(shí)細(xì)胞消化適度)進(jìn)行消化,放入細(xì)胞培養(yǎng)箱中約2-3min。 
加入適量DMEM完全培養(yǎng)基終止胰蛋白酶消化,轉(zhuǎn)移至離心管后500g離心2min,棄上清液,再加入DMEM完全培養(yǎng)基清洗,棄上清液。
加入DMEM完全培養(yǎng)基,輕輕吹打混勻,吸取10微升進(jìn)行計(jì)數(shù),然后按照所需細(xì)胞量在含5% CO2的細(xì)胞培養(yǎng)箱繼續(xù)培養(yǎng)。

3.細(xì)胞凍存
當(dāng)細(xì)胞密度達(dá)到80%~90%時(shí),去掉完全培養(yǎng)基,用1X PBS清洗2次。加入胰蛋白酶進(jìn)行消化,放入細(xì)胞培養(yǎng)箱中約2-3min。加入DMEM完全培養(yǎng)基終止胰蛋白酶消化,轉(zhuǎn)移至離心管后500g離心2min,棄上清液,再加入DMEM完全培養(yǎng)基清洗,棄上清液。加入lml凍存液(90%胎牛血清,10% DMSO。 
一般來講血清含量可以在10%-90%之間調(diào)整,凍存液中加入血清一方面可以為細(xì)胞提供營養(yǎng),另一方面可以在細(xì)胞凍存過程中提供非滲透性保護(hù)物質(zhì),如蔗糖,白蛋白等從而更好地保護(hù)細(xì)胞),放入凍存管內(nèi)(管內(nèi)有異丙醇,以保證溫度降低的速度),立即放入4oC冰箱中凍存30min,然后放入-20oC冰箱中凍存30min,再置于-80冰箱內(nèi)過夜。
*
天放入液氮中,可以保存至少兩年,如不放人液氮,可以保存三個(gè)月。 
細(xì)胞凍存和復(fù)蘇的原則是:慢凍速融,這樣更加有利于保持細(xì)胞的活力。凍存細(xì)胞不加任何保護(hù)劑,會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞內(nèi)冰晶的產(chǎn)生,從而使細(xì)胞產(chǎn)生內(nèi)源性的機(jī)械損傷,引起細(xì)胞內(nèi)環(huán)境滲透壓,PH,電解質(zhì)等的改變,進(jìn)而促使細(xì)胞死亡。

注意事項(xiàng):
乳腺成纖維細(xì)胞1)預(yù)熱培養(yǎng)用液:把已經(jīng)配制好的裝有培養(yǎng)液、PBS和胰蛋白酶的瓶子放入37水浴鍋內(nèi)預(yù)熱;
2)用75%酒精擦拭經(jīng)過紫外線照射的超凈工作臺(tái)和雙手;
3)正確擺放使用的器械:保證足夠的操作空間,不僅便于操作而且減少污染;
4)點(diǎn)燃酒精燈:注意火焰不能太小;
5)嚴(yán)格的無菌操作;
6)貼壁細(xì)胞消化適度:消化的時(shí)間受消化液的種類、配制時(shí)間、加入培養(yǎng)瓶中的量等諸多因素的影響,消化過程中應(yīng)該注意培養(yǎng)細(xì)胞形態(tài)的變化,一旦胞質(zhì)回縮,連接變松散,或有成片浮起的跡象就要立即終止消化;
7)傳代細(xì)胞所有的操作盡量靠近酒精燈火焰。每次*只進(jìn)行一種細(xì)胞的操作,每種細(xì)胞使用一套器材。避免交叉感染;
8)傳代細(xì)胞瓶口每次打開或者關(guān)閉都需要在酒精燈上消毒。

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