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基本信息：

定義與來源

- 定義：大鼠原代細(xì)胞是直接從大鼠組織或器官中分離、未經(jīng)長期傳代培養(yǎng)的細(xì)胞，保留了細(xì)胞在體內(nèi)的原始生物學(xué)特性。
- 來源：常見供體為4-6周齡、體重150-200g的SD或Wistar大鼠，組織來源包括肝臟、肺、腦、肌肉等。

特點

- 生理相關(guān)性：與大鼠體內(nèi)細(xì)胞功能高度相似。
- 有限增殖能力：體外傳代次數(shù)通常不超過5-10代，避免傳代過程中細(xì)胞特性丟失。
- 異質(zhì)性：同一組織分離的細(xì)胞可能包含多種類型（如肝細(xì)胞與肝竇內(nèi)皮細(xì)胞），需通過純化（如密度梯度離心、流式細(xì)胞術(shù)）提高純度。
- 倫理要求：需遵循實驗動物倫理規(guī)范，確保來源合規(guī)。

分離與培養(yǎng)關(guān)鍵步驟

- 分離方法：
- 酶消化法：常用膠原酶、胰蛋白酶消化組織（如肝臟剪碎后用膠原酶IV消化），獲得單細(xì)胞懸液。
- 機(jī)械分離法：適用于易碎組織（如腦組織），通過研磨、篩網(wǎng)過濾獲取細(xì)胞。
- 培養(yǎng)條件：
- 培養(yǎng)基：根據(jù)細(xì)胞類型選擇（如肝細(xì)胞用Williams E培養(yǎng)基，神經(jīng)元用Neurobasal培養(yǎng)基），常添加胎牛血清（5%-10%）、生長因子（如EGF、bFGF）。
- 環(huán)境：37℃、5% CO?培養(yǎng)箱，貼壁細(xì)胞需鋪基質(zhì)（如膠原、纖連蛋白）促進(jìn)貼壁。

注意事項：

該細(xì)胞只可用于科研。出現(xiàn)以下情況不予以重發(fā)：客戶造成細(xì)胞污染；客戶不正確操作致細(xì)胞狀態(tài)不好；細(xì)胞狀態(tài)不好，未提供細(xì)胞培養(yǎng)前3天照片；細(xì)胞培養(yǎng)時經(jīng)其它處理；細(xì)胞收到2天內(nèi)，未告知相關(guān)情況。

細(xì)胞操作步驟:

傳代步驟：

棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細(xì)胞1 - 2次。
加2ml消化液（0.25% Trypsin - 0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1 - 2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
按6 - 8ml/瓶補加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1 - 2mL培養(yǎng)液后吹勻。
將細(xì)胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
復(fù)蘇步驟：
將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1 - 2mL培養(yǎng)基后吹勻。換液并檢查細(xì)胞密度。
凍存步驟：
以T25瓶為例：
細(xì)胞凍存時，棄去培養(yǎng)基后，PBS清洗瓶底1 - 2次后加入1ml，細(xì)胞變圓脫落后，加入2ml培養(yǎng)基終止消化，可使用血球計數(shù)板計數(shù)。
1000RPM離心5分鐘去掉上清，用血清重懸浮，加DMSO至最終濃度為10%。加入DMSO后迅速混勻，按每1ml的數(shù)量分配到凍存管中，注意凍存管做好標(biāo)識。
將凍存管置于程序降溫盒中，放入 - 80℃冰箱，至少2個小時以后轉(zhuǎn)入液氮灌儲存，記錄凍存管位置以便下次拿取。
公司出售的產(chǎn)品：