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使用方法：
收到細胞NK細胞直銷后，請按照以下方法進行操作。
1. 取出25cm2培養(yǎng)瓶，75%酒精消毒，拆下封口膜，放入37℃，5% CO2細胞培養(yǎng)箱中靜置6-8小時或者過夜，以穩(wěn)定細胞狀態(tài)。
2. 待細胞達到80%匯合時準備進行傳代培養(yǎng)。
3. 細胞傳代
1) 吸出25cm2培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基，用PBS清洗細胞一次；
2) 添加0.125%胰蛋白酶消化液約1mL至培養(yǎng)瓶中，37℃溫浴3min左右；倒置顯微鏡下觀察，待細胞回縮變圓后吸棄消化液，再加入完全培養(yǎng)液終止消化；
3) 用吸管輕輕吹打混勻，按1:2或1:3等適當?shù)谋壤M行接種傳代，然后補充新鮮的完全培養(yǎng)基至5mL，放入37℃，5% CO2細胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；
4) 待細胞完全貼壁后，培養(yǎng)觀察。之后每隔2-3天更換新鮮的完全培養(yǎng)基。

公司產(chǎn)品僅用于科研
中文名稱： NK細胞直銷
簡稱：NK細胞

種屬：

來源：

培養(yǎng)基：

狀態(tài)：

產(chǎn)品規(guī)格：

單位：

貨號：AE1317

基本特性：
（ 1 ）組織來源于正常人肺組織。
（ 2 ）鑒定：肌動蛋白， alpha-SMA 和 Desmin 免疫熒光染色。
（ 3 ）原代細胞培養(yǎng)末期液氮凍存。
（ 4 ）每凍存管細胞數(shù)： 500000cells/1ml 。
（ 5 ）肌動蛋白， alpha-SMA 和 Desmin 免疫熒光染色驗證。
（ 6 ）不含有 HIV-1 、 HBV 、 HCV 、支原體、細菌、酵母和真菌。

操作規(guī)程：
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備：
1）準備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO，貨號21875-091)，90%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%。
2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配，液氮儲存。
二．細胞處理：
1）復蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。*天換液并檢查細胞密度。
2）細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。產(chǎn)品僅供科研使用
對于懸浮細胞，傳代可參考以下方法：
方法一：收集細胞，1000RPM，常溫條件下離心5分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

新生霉素增菌肉湯shēng huà shì jì容量：100克  Humanleukemiainhibitoryfactorreceptor,LIFRELISA試劑盒人抑制因子受體(LIFR)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

PH緩沖溶液NA  組織檸檬酸合成酶活性比色法定量檢測試劑盒20次

DL-絲酸100克  Humanimmunosuppressiveacidicprotein,IAPELISAKit人酸性蛋白(IAP)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

月桂烯 Myrcene,≥90.0% 123-35-3 25ML 通用試劑  人血血小板衍生生長因子可溶性受體α(PDGFsR-α)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝

叔丁醇 litxium tqrt-butoxidq 1907-33-1  豬樣生長因子1(IGF-1)免疫試劑盒 Porcine IGF-1 ELISA Kit
瓊脂粉shēng huà shì jì容量：RT，避光25克  軟骨寡聚蛋白(COMP)ELISA試劑盒 ，英文名： COMP ELISA Kit

81678-16-2亮酸腦啡肽;L-酪酰甘酰甘酰-L-本丙酰-L-白酸;白酸腦啡肽Leucine enkephalin;[5-Leucine] Enkephalin;Enkephalin L;[Leu5]Enkephalin  Porcineplasminogenactivatorinhibitor1,PAI-1ELISA試劑盒豬纖溶酶原激活物抑制因子1(PAI-1)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

小牛血清shēng huà shì jì容量：100克  HumanAngiopoietin4,ANG-4ELISA試劑盒人生成素4(ANG-4)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

2-基-4-二苯基醚 2-Amino-4-chlorophenyl phenyl ,97% 93-67-4 25G 通用試劑  HumanAtaxiatelangiectasiamated,ATMELISAKit人性突變基因(ATM)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

二本基二錄硅烷;二本基二錄化硅;二錄二本基硅烷 Diphqnyldichlorosilcnq;Dichlorodiphqnylsilcnq 1980-10-4  人β半乳糖苷酶(βGAL)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
克氏鐵瓊脂25克  MouseCyclosporineA,CsAELISA試劑盒小鼠環(huán)孢素A(CsA)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

TrypsinInhibitor, 100mg/1g Amresco分裝  ELISAKitColⅣ小鼠Ⅳ型膠原規(guī)格：48T/96T

甲基紅鈉shēng huà shì jì容量：1公斤  ChickenIerleukin1β,IL-1βELISAKit雞白介素1β(IL-1β)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

4-羌基二本同;隊羌基二本同;隊本酰本酚 4-xy7noxybqnzophqnonq;p-xy7noxybqnzophqnonq;p-Bqnzoylphqnol;(4-xy7noxyphqnyl)phqnylMqthcnonq;4-xy7noxyphqnyl phqnyl kqtonq;4-xy7noxydiphqnyl kqtonq 1137-4-4  人基質(zhì)金屬蛋白酶3(MMP-3)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝

紅細胞NADH高鐵血紅蛋白還原酶測試盒shēng huà shì jì容量：RT5個/包  小鼠的牛血清白蛋白殘留檢測免疫試劑盒 Mouse rudimeal bovine serum albumin check-up ELISA Kit
NK細胞直銷二花黃FF，英文名或英文縮寫：Xylene cyanole FF，級別：高純，98%，規(guī)格：500克  Humanfractalkine/CX3CL1ELISAKit人趨化因子(fractalkine/CX3CL1)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

54761-04-5三扶鐿YTTERBIUM(III) TRIFLUOROmetxANESULFONATE HYDRATE  綿羊白介素6(IL-6)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝

xy7noXYPROPYL-B-CYCLODEXTRIN羥丙基-B-環(huán)糊精高純級白色粉末RTsigma  人脂肪甘油三酯脂酶(ATGL)免疫試劑盒 Human Adipose iglyceride Lipase,ATGL ELISA kit

香芹酮 L-Carvone,99% 6485-40-1 25G 通用試劑  淋巴細胞功能相關抗原2(LFA-2/CD2)ELISA試劑盒 ，英文名： LFA-2/CD2 ELISA Kit

氫二鈉七水物/七水合二鈉/七水合二鹽基鈉/七水合氫二鈉/SSodium phosphate dibasic heptahydrate AR，98% 100克 國產(chǎn)/進口  Ratcarnitine-acylcarnitineanslocase,CACTELISA試劑盒大鼠肉毒堿脂酰轉移酶(CACT)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

實驗操作：
1、培養(yǎng)瓶預包被。試驗前一天預包培養(yǎng)瓶，置于超靜臺吹干或45℃烘箱烘干（切記保持無菌），4℃冰箱放置，備用。
2、取材：正常成年大鼠腹腔注射5%苯巴比妥，75%酒精浸泡，無菌條件下迅速取出大鼠主動脈。
3、材料預處理：將獲取的放入含有1% P/S的1 × PBS （pH 7.4 ）中反復洗滌，去除外部的血漬，洗滌液澄清，用無菌鑷子剝?nèi)ネ饽っ娴臍埩艚M織。PBS洗滌凈。
4、除去內(nèi)皮細胞：將縱向剪開， 內(nèi)膜面向上，無菌鑷子沿中軸方向反復刮動內(nèi)膜層4-5遍，去掉內(nèi)皮細胞，用1 × PBS （pH 7.4 ）洗滌3次。
5、分離中膜：將去掉內(nèi)膜的，繼續(xù)刮動分離中膜，去掉外膜，用眼科剪將內(nèi)膜剪碎為1×1mm3的小塊，加入1 × PBS （pH 7.4 ），轉移到15ml 離心管中，PBS洗滌3次，離心收集沉淀物。
6、消化：在洗凈的內(nèi)膜碎塊中加入消化酶液，將離心管放入37℃水浴消化15min。
7、終止消化：吸出消化液入新的離心管中，按1：1加入消化終止液，中止酶反應；余下的組織繼續(xù)加入消化液，消化15min ，重復消化3次。
8、收集重懸細胞：收集中止后的消化液于離心管中，1000 rpm，離心10 min，棄去上清，加入培養(yǎng)液重懸，染色計數(shù)細胞。
9、培養(yǎng)細胞密度：調(diào)整細胞密度以5 × 105個/ml 接種入培養(yǎng)瓶。
10、培養(yǎng)：放置于37℃，5% CO2培養(yǎng)箱中。