產(chǎn)地 | 科研 |
保存條件 | 低溫冷藏 |
品牌 | 帛科 |
貨號(hào) | AE1354 |
用途 | 公司產(chǎn)品僅用于科研 |
組織來(lái)源 | |
細(xì)胞形態(tài) | 懸浮 |
是否是腫瘤細(xì)胞 | 否 |
CAS編號(hào) | |
保質(zhì)期 | 詳見(jiàn)說(shuō)明書(shū) |
器官來(lái)源 | 詳見(jiàn)說(shuō)明書(shū) |
免疫類(lèi)型 | 詳見(jiàn)說(shuō)明書(shū) |
品系 | 詳見(jiàn)說(shuō)明書(shū) |
生長(zhǎng)狀態(tài) | 詳見(jiàn)說(shuō)明書(shū) |
物種來(lái)源 | |
包裝規(guī)格 | |
純度 | % |
是否進(jìn)口 | 是 |
公司產(chǎn)品僅用于科研
中文名稱: 視網(wǎng)膜微內(nèi)皮細(xì)胞現(xiàn)貨供應(yīng)
簡(jiǎn)稱:視網(wǎng)膜微內(nèi)皮細(xì)胞
種屬:
來(lái)源:
培養(yǎng)基:
狀態(tài):
產(chǎn)品規(guī)格:
單位:
貨號(hào):AE1354
基本特性:
( 1 )組織來(lái)源于正常人肺組織。
( 2 )鑒定:肌動(dòng)蛋白, alpha-SMA 和 Desmin 免疫熒光染色。
( 3 )原代細(xì)胞培養(yǎng)末期液氮凍存。
( 4 )每?jī)龃婀芗?xì)胞數(shù): 500000cells/1ml 。
( 5 )肌動(dòng)蛋白, alpha-SMA 和 Desmin 免疫熒光染色驗(yàn)證。
( 6 )不含有 HIV-1 、 HBV 、 HCV 、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌。
使用方法:
收到細(xì)胞視網(wǎng)膜微內(nèi)皮細(xì)胞現(xiàn)貨供應(yīng)后,請(qǐng)按照以下方法進(jìn)行操作。
1. 取出25cm2培養(yǎng)瓶,75%酒精消毒,拆下封口膜,放入37℃,5% CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱中靜置6-8小時(shí)或者過(guò)夜,以穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài)。
2. 待細(xì)胞達(dá)到80%匯合時(shí)準(zhǔn)備進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
3. 細(xì)胞傳代
1) 吸出25cm2培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基,用PBS清洗細(xì)胞一次;
2) 添加0.125%胰蛋白酶消化液約1mL至培養(yǎng)瓶中,37℃溫浴3min左右;倒置顯微鏡下觀察,待細(xì)胞回縮變圓后吸棄消化液,再加入完全培養(yǎng)液終止消化;
3) 用吸管輕輕吹打混勻,按1:2或1:3等適當(dāng)?shù)谋壤M(jìn)行接種傳代,然后補(bǔ)充新鮮的完全培養(yǎng)基至5mL,放入37℃,5% CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng);
4) 待細(xì)胞完全貼壁后,培養(yǎng)觀察。之后每隔2-3天更換新鮮的完全培養(yǎng)基。
實(shí)驗(yàn)操作:
1、培養(yǎng)瓶預(yù)包被。試驗(yàn)前一天預(yù)包培養(yǎng)瓶,置于超靜臺(tái)吹干或45℃烘箱烘干(切記保持無(wú)菌),4℃冰箱放置,備用。
2、取材:正常成年大鼠腹腔注射5%苯巴比妥,75%酒精浸泡,無(wú)菌條件下迅速取出大鼠主動(dòng)脈。
3、材料預(yù)處理:將獲取的放入含有1% P/S的1 × PBS (pH 7.4 )中反復(fù)洗滌,去除外部的血漬,洗滌液澄清,用無(wú)菌鑷子剝?nèi)ネ饽っ娴臍埩艚M織。PBS洗滌凈。
4、除去內(nèi)皮細(xì)胞:將縱向剪開(kāi), 內(nèi)膜面向上,無(wú)菌鑷子沿中軸方向反復(fù)刮動(dòng)內(nèi)膜層4-5遍,去掉內(nèi)皮細(xì)胞,用1 × PBS (pH 7.4 )洗滌3次。
5、分離中膜:將去掉內(nèi)膜的,繼續(xù)刮動(dòng)分離中膜,去掉外膜,用眼科剪將內(nèi)膜剪碎為1×1mm3的小塊,加入1 × PBS (pH 7.4 ),轉(zhuǎn)移到15ml 離心管中,PBS洗滌3次,離心收集沉淀物。
6、消化:在洗凈的內(nèi)膜碎塊中加入消化酶液,將離心管放入37℃水浴消化15min。
7、終止消化:吸出消化液入新的離心管中,按1:1加入消化終止液,中止酶反應(yīng);余下的組織繼續(xù)加入消化液,消化15min ,重復(fù)消化3次。
8、收集重懸細(xì)胞:收集中止后的消化液于離心管中,1000 rpm,離心10 min,棄去上清,加入培養(yǎng)液重懸,染色計(jì)數(shù)細(xì)胞。
9、培養(yǎng)細(xì)胞密度:調(diào)整細(xì)胞密度以5 × 105個(gè)/ml 接種入培養(yǎng)瓶。
10、培養(yǎng):放置于37℃,5% CO2培養(yǎng)箱中。
霧抑制劑shēng huà shì jì容量:2~8℃1毫克 牛膽酸(Cholicacid)ELISA檢測(cè)試劑盒BovineCholicacidELISAKit 96T/48T
52092-43-02-溴-4-硝基 N-氧,97%2-Bromo-4-nitnopyridine 1-oxide 人B細(xì)胞κ 輕肽基因增強(qiáng)子核因子抑制因子ε(NFKBIE)免疫試劑盒 Human NFKBIE ELISA Kit
N-三(羥甲基)甲基-3-基丙磺酸鈉鹽50次/300ul/支保存:-20℃ 英文名稱MouseEpidermalgrowthFactorELISAKit小鼠表皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子(EGF)規(guī)格:96T/48T
2,3-二基-2-環(huán)務(wù)烯-1-同 2,3-DIMqTHYL-2-CYCLOPqNTqN-1-ONq 111-02-7 冰凍切片蔗糖酶活性染色試劑盒50次
2-奈胺-1-磺酸25克 Ratcarbonicanhydrase2,CA-2ELISA試劑盒大鼠酶2(CA-2)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
七號(hào)膽鹽shēng huà shì jì容量:25克 ELISAKitMCP-4/CCL13小鼠單核細(xì)胞趨化蛋白4規(guī)格:48T/96T
(膠原酶 HeneggImmunoglobulinofYolk,IgYELISAKit雞卵黃免疫球蛋白(IgY)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
3-吲哚25克 人抗體(ai-HDV)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
醋烯炳酯 99% cllyl ccqtctq 291-87-7 小鼠基質(zhì)金屬蛋白酶5(MMP-5)免疫試劑盒 Mouse maix metalloproteinase 5,MMP-5 ELISA Kit
胞嘧啶;4-安基-2-羌基嘧啶;;氧胞嘧啶;胞嗪;4-安基-2-羌基嘧啶 Cytosinq;4-cMino-2-oxo-1,2- dixy7nopyriMidinq;4-cMino-2-pyriMidinol;Cyt 71-30-7 乙酰膽堿受體抗體(AChRab)ELISA試劑盒 ,英文名: AChRab ELISA Kit
井岡霉素5克 人單核細(xì)胞增多性李斯特菌素(listeriolysin)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
(對(duì)硝本基-b-D- 小鼠6酮素(6-K-PG)免疫試劑盒 Mouse 6-keto-prostaglandin,6-K-PG ELISA Kit
四,英文名或英文縮寫(xiě):Lead(IV)acetate,級(jí)別:CP,98.5%,規(guī)格:1克 突觸回蛋白2(SYNJ2)ELISA試劑盒 ,英文名: SYNJ2 ELISA Kit
8-羌基流醋鹽;流醋-8-羌基;流醋氧化;奎諾蘇 8-xy7noxyinoneolinq sulfctq;8-inoneophqnol sulfctq;Oxinq sulfctq;inoneosol;Chinosol 134-31-6 MouseP-SelectinELISA試劑盒小鼠P選擇素(P-Selectin/CD62P)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
鍺,英文名或英文縮寫(xiě):Germanium,級(jí)別:AR,99.5%,規(guī)格:25克 ChickenHerpessimplexvirusⅡaibody,HSVⅡ-AbELISA試劑盒雞單純病毒Ⅱ型抗體(HSVⅡ-Ab)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
視網(wǎng)膜微內(nèi)皮細(xì)胞現(xiàn)貨供應(yīng)對(duì)本二酸二shēng huà shì jì容量:100克 Humanurokinaseplasminogenactivator,uPAELISA試劑盒人尿激酶型纖溶酶原激活物(uPA)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
(馬鈴薯淀粉) ELISAKitACP-5b小鼠抗酸性酶5b規(guī)格:48T/96T
2,6-二叔丁基對(duì)500毫克 Humanai-cytomegalovirusIgMaibody,ai-CMVIgMELISAKit人胎兒血紅蛋白(HBF)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
4-肖基本;隊(duì)肖基本 4-nitnophqnylhydrczinq 100-16-3 人抗組蛋白抗體(AHA)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
L-阿拉伯糖1克2~8℃ 小鼠免疫球蛋白A(IgA)免疫試劑盒 Mouse Immunoglobulin,IgA ELISA Kit
操作規(guī)程:
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備:
1)準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO,貨號(hào)21875-091),90%;優(yōu)質(zhì)胎牛血清,10%。
2)培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37℃,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3)凍存液:90%血清,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配,液氮儲(chǔ)存。
二.細(xì)胞處理:
1)復(fù)蘇細(xì)胞:將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于凍存管蓋部)搖晃解凍,移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過(guò)夜。*天換液并檢查細(xì)胞密度。
2)細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。產(chǎn)品僅供科研使用
對(duì)于懸浮細(xì)胞,傳代可參考以下方法:
方法一:收集細(xì)胞,1000RPM,常溫條件下離心5分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,將細(xì)胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。