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公司產(chǎn)品僅用于科研
中文名稱： 鼓膜上皮干細胞特價
簡稱：鼓膜上皮干細胞

種屬：

來源：

培養(yǎng)基：

狀態(tài)：

產(chǎn)品規(guī)格：

單位：

貨號：AE1360
基本特性：
（ 1 ）組織來源于正常人肺組織。
（ 2 ）鑒定：肌動蛋白， alpha-SMA 和 Desmin 免疫熒光染色。
（ 3 ）原代細胞培養(yǎng)末期液氮凍存。
（ 4 ）每凍存管細胞數(shù)： 500000cells/1ml 。
（ 5 ）肌動蛋白， alpha-SMA 和 Desmin 免疫熒光染色驗證。
（ 6 ）不含有 HIV-1 、 HBV 、 HCV 、支原體、細菌、酵母和真菌。

使用方法：
收到細胞鼓膜上皮干細胞特價后，請按照以下方法進行操作。
1. 取出25cm2培養(yǎng)瓶，75%酒精消毒，拆下封口膜，放入37℃，5% CO2細胞培養(yǎng)箱中靜置6-8小時或者過夜，以穩(wěn)定細胞狀態(tài)。
2. 待細胞達到80%匯合時準備進行傳代培養(yǎng)。
3. 細胞傳代
1) 吸出25cm2培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基，用PBS清洗細胞一次；
2) 添加0.125%胰蛋白酶消化液約1mL至培養(yǎng)瓶中，37℃溫浴3min左右；倒置顯微鏡下觀察，待細胞回縮變圓后吸棄消化液，再加入完全培養(yǎng)液終止消化；
3) 用吸管輕輕吹打混勻，按1:2或1:3等適當?shù)谋壤M行接種傳代，然后補充新鮮的完全培養(yǎng)基至5mL，放入37℃，5% CO2細胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；
4) 待細胞完全貼壁后，培養(yǎng)觀察。之后每隔2-3天更換新鮮的完全培養(yǎng)基。

實驗操作：
1、培養(yǎng)瓶預包被。試驗前一天預包培養(yǎng)瓶，置于超靜臺吹干或45℃烘箱烘干（切記保持無菌），4℃冰箱放置，備用。
2、取材：正常成年大鼠腹腔注射5%苯巴比妥，75%酒精浸泡，無菌條件下迅速取出大鼠主動脈。
3、材料預處理：將獲取的放入含有1% P/S的1 × PBS （pH 7.4 ）中反復洗滌，去除外部的血漬，洗滌液澄清，用無菌鑷子剝去外膜面的殘留組織。PBS洗滌凈。
4、除去內皮細胞：將縱向剪開， 內膜面向上，無菌鑷子沿中軸方向反復刮動內膜層4-5遍，去掉內皮細胞，用1 × PBS （pH 7.4 ）洗滌3次。
5、分離中膜：將去掉內膜的，繼續(xù)刮動分離中膜，去掉外膜，用眼科剪將內膜剪碎為1×1mm3的小塊，加入1 × PBS （pH 7.4 ），轉移到15ml 離心管中，PBS洗滌3次，離心收集沉淀物。
6、消化：在洗凈的內膜碎塊中加入消化酶液，將離心管放入37℃水浴消化15min。
7、終止消化：吸出消化液入新的離心管中，按1：1加入消化終止液，中止酶反應；余下的組織繼續(xù)加入消化液，消化15min ，重復消化3次。
8、收集重懸細胞：收集中止后的消化液于離心管中，1000 rpm，離心10 min，棄去上清，加入培養(yǎng)液重懸，染色計數(shù)細胞。
9、培養(yǎng)細胞密度：調整細胞密度以5 × 105個/ml 接種入培養(yǎng)瓶。
10、培養(yǎng)：放置于37℃，5% CO2培養(yǎng)箱中。
芴甲氧羰基-L-谷酸5-叔丁酯，英文名或英文縮寫：Fmoc-Glu(OtBu)-OH，級別：BR，98%，規(guī)格：1克  ELISAKitTGF-β1豚鼠轉化生長因子β1規(guī)格：48T/96T

(LB肉湯)  Chickengrowthhormone,GHELISAKit雞生長激素(GH)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

L-AsparagineL-天冬素10克BR，99%  人肌腱蛋白R(TN-R)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝

脫落醋(+4℃)(見30000160) cbscisic ccid 14372-42-  小鼠催產(chǎn)素(OT)免疫試劑盒 Mouse oxytocin,OT ELISA Kit

香草醛 Vanillin (99%) 121-33-5 25G 通用試劑  生成素1(ANG-1)ELISA試劑盒 ，英文名： ANG-1 ELISA Kit
葡萄糖酸銅25克  RatBonemorphogeneticprotein6,BMP-6ELISA試劑盒大鼠骨形成蛋白6(BMP-6)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

(麗春紅)  小鼠Ⅰ型膠原N末端肽(X)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝

酸鈣，英文名或英文縮寫：Calcium iodate，級別：AR，99%，規(guī)格：5克  Human motilin (MTL) ELISA Kit 人胃動素(MTL)ELISA試劑盒

ε-己內酯 6-Hqxcnolcctonq 20-44-3  HumanImmunoreactivegrowthhormone,irGHELISAKit 人免疫反應性生長激素(irGH)ELISA試劑盒 96T/48T 進口分裝

葛根素，英文名或英文縮寫：Puerarin，級別：BR，粘度50 mpe.s，規(guī)格：10克  HumanCoicosterone,COELISA試劑盒人皮質同/腎上腺同(CO)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T
精脒，英文名或英文縮寫：Spermidine，級別：BR，98%，規(guī)格：1克  英文名稱MouseMIP-5ELISAKit小鼠巨噬細胞蛋白-5(MIP-5)規(guī)格：96T/48T

HE瓊脂HEKTOEN ENTERIC AGAR FOR  冰凍切片b-葡糖苷酸酶活性染色試劑盒50次

Aluminum鋁絲50毫克AR，99%  Rabbiturokinaseplasminogenactivator,uPAELISA試劑盒兔尿激酶型纖溶酶原激活物(uPA)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

均本四加醋 1,2,4,5-Bqnzqnqtqtrcccrboxylic ccid 1989-2-4  小鼠α-乳清蛋白(αLA)ELISA試劑盒 ，英文名： αLA ELISA Kit

米力農(nóng) Milrinonq 78412-7-  人白三烯E4(LTE4)ELISA檢測試劑盒HumanleukoieneE4,LT-E4ELISAKit 96T/48T
鼓膜上皮干細胞特價動力-鹽培養(yǎng)基shēng huà shì jì容量：RT25克  英文名稱MousecatecholamineELISAKit小鼠兒茶酚胺(CA)規(guī)格：96T/48T

D-Galactose 25g/100g/500g INALCO原裝  冰凍切片捺脂鹽脂酶活性染色試劑盒50次

4-(二甲基)25克RT  RatapoproteinB100,apo-B100ELISA試劑盒大鼠載脂蛋白B100(apo-B100)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

姆沙伯 G HP Chromosorb G-HP  小鼠CD320分子(CD320)ELISA試劑盒 ，英文名： CD320 ELISA Kit

聚乙二醇 300 Poly(ethylene glycol) 300 (PEG 300) 25322-68-3 250ML 通用試劑  人脫氧酚/脫氧啉(DPD)ELISA檢測試劑盒Humandeoxypyridinoline,DPDELISAKit 96T/48T
操作規(guī)程：
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備：
1）準備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO，貨號21875-091)，90%；優(yōu)質胎牛血清，10%。
2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配，液氮儲存。
二．細胞處理：
1）復蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。*天換液并檢查細胞密度。
2）細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。產(chǎn)品僅供科研使用
對于懸浮細胞，傳代可參考以下方法：
方法一：收集細胞，1000RPM，常溫條件下離心5分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。