產地 | 進口、國產 |
品牌 | 帛科 |
貨號 | BKP3689 |
用途 | 公司產品僅用物科研 |
包裝規(guī)格 | 50次 |
純度 | % |
CAS編號 | |
是否進口 | 是 |
本產品只適用于科研,不能用于臨床診斷。
技術服務內容:
實驗步驟包括RNA提取、反轉錄、PCR和瓊脂糖凝膠電泳,以軟件分析電泳條帶的灰度值(IOD值),通過與內參基因的灰度值比較,判斷目的mRNA的相對表達量。
產品名稱 | 英文名稱 | 貨號 |
黃桿菌通用PCR檢測試劑盒直銷 | Flavobacterium spp.PCR | BKP3689 |
PCR實驗方法步驟:
方法
1:在冰浴中,按以下次序將各成分加入一無菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer
5 μl dNTP mix (2mM)
4 μl 引物1(10pM)
2 μl 引物2(10pM)
2 μl Taq酶 (2U/μl)
1 μl DNA模板(50ng-1μg/μl)
1 μl 加ddH2O至 50 μl
視PCR儀有無熱蓋,不加或添加石蠟油。
2:調整好反應程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執(zhí)行擴增。一般:在93℃預變性3-5min,進入循環(huán)擴增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環(huán)30-35次,在72℃ 保7min。
3:伴放線放線桿菌探針法熒光定量PCR試劑盒結束反應,PCR產物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4:PCR的電泳檢測:如在反應管中加有石蠟油,需用100μ進行抽提反應混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測。
反應五要素:
參加PCR反應的物質主要有五種即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物:引物是PCR特異性反應的關鍵,PCR 產物的特異性取決于引物與模板DNA互補的程度。理論上,只要知道任何一段模板DNA序列, 就能按其設計互補的寡核苷酸鏈做引物,利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴增。設計引物應遵循以下原則:
①引物長度: 15-30bp,常用為20bp左右。
②引物擴增跨度: 以200-500bp為宜,特定條件下可擴增長至10kb的片段。
③引物堿基:G+C含量以40-60%為宜,G+C太少擴增效果不佳,G+C過多易出現(xiàn)非特異條帶。ATGC*隨機分布,避免5個以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物內部出現(xiàn)二級結構,避免兩條引物間互補,特別是3'端的互補,否則會形成引物二聚體,產生非特異的擴增條帶。
⑤引物3'端的堿基,特別是最末及倒數*個堿基,應嚴格要求配對,以避免因末端堿基不配對而導致PCR失敗。
⑥引物中有或能加上合適的酶切位點, 被擴增的靶序列*有適宜的酶切位點, 這對酶切分析或分子克隆很有好處。
⑦引物的特異性:引物應與核酸序列數據庫的其它序列無明顯同源性。
引物量:每條引物的濃度0.1~1umol或10~100pmol,以*引物量產生所需要的結果為好,引物濃度偏高會引起錯配和非特異性擴增,且可增加引物之間形成二聚體的機會。
大鼠胚胎心肌細胞;H9c2(2-1) 細胞,SHG-44細胞 W6/32細胞,小鼠B細胞雜交瘤細胞P-DImetxYLAMINOCINNAMALDEHYDE對二甲基肉桂醛*橙棕色粉末FRZsigma
Raw264.7, 小鼠單核巨噬細胞細胞 Mouse苯芴酮 Phenylfluorone,978 975-17-7 25G 通用試劑
CD99L2 Others Mouse 小鼠 CD99L2 / MIC2L1 人細胞裂解液 (陽性對照) 格拉司瓊相關物質B Grcnisqtron Rqlctqd CoMpound B;N-[(1R,3r,5S)-9-Mqthyl-9-czcbicyclo[3.3.1]non-3-yl]-1H-indczolq-3-ccrboxcMidq 107007-92-4
成纖維細胞培養(yǎng)基-2FM-2-prfGly-Vlu甘酰-L-纈酸1克BR,98%
PROM1 Others Rat 大鼠 CD133 / PROM1 / Prominin 1 人細胞裂解液 (陽性對照) 112-34-5二乙二醇一丁;二乙二醇丁;二羥二;丁基卡別妥爾;二甘醇一丁;2-(2-丁氧基乙氧基)乙醇;二乙二醇單丁Dietxylene glycol Monobutyl ;Butyl digol;Butyl diicinol;2-(2-Butoxyethoxy)ethanol
小鼠胚胎成纖維細胞(來自NIH3T3);PA12神經肽Y(2-36),人,大鼠Neuropeptide Y (2-36) (human,rat)質量規(guī)格:>95%,BR
GGT1 Others Rat 大鼠 GGT1 人細胞裂解液 (陽性對照) 神經肽Y(22-36)Neuropeptide Y (22-36)質量規(guī)格:>95%,BR
人平滑肌細胞完全培養(yǎng)基 100mL神經肽Y(3-36),豬Neuropeptide Y (3-36)(porcine)質量規(guī)格:>95%,BR
M1細胞,小鼠細胞 脆弱擬桿菌 新生牛眼Tenon's囊成纖維細胞;NBTF骨鈣素(7-19),人Osteocalcin (7-19) (human)質量規(guī)格:>95%,BR
CXCL12 Protein Human 重組人 CXCL12 / SDF-1 蛋白 (isoform a)成骨生長肽Osteogenic Growth Peptide質量規(guī)格:>95%,BR
黃桿菌通用PCR檢測試劑盒直銷青霉素/鏈霉素溶液P/SL-脯氨酰胺L-Prolinamide質量規(guī)格:0.98
VEGFA Others Canine 狗 VEGF / VEGFA 人細胞裂解液 (陽性對照) L-谷氨酸(標準品)L-Glutamic acid質量規(guī)格:>99%(TLC),標準品
人急性T細胞細胞;Jurkat, Clone E6-1L-谷氨酸(sigma)L-Glutamic acid質量規(guī)格:>99%,Sigma分裝
H7402細胞,人細胞 小鼠艾氏腹水癌細胞,EAC細胞 非洲綠猴腎細胞;VERO-76DL-谷氨酸DL-Glutamic acid monohydrate質量規(guī)格:>98%,水合物
MGC80-3(人細胞) 5×106cells/瓶×2肌氨酸Sarcosine 質量規(guī)格:>99%,BR
ARPE-19(人視網膜上皮細胞) 5×106cells/瓶×2泛影酸鈉(>98%,BC)質量規(guī)格:>98%,BC diatrizoate dihydrate
CXADR Others Mouse 小鼠 CXADR 人細胞裂解液 (陽性對照) 氟鋁酸鈉(>98%,BR)質量規(guī)格:>98%,BR fluoroaluminate
兔腎細胞;RK-13馬尿酸鈉(>98%,BR)質量規(guī)格:>98%,BR hippurate
IL12A & IL12B Others Mouse 小鼠 IL12A & IL12B Heterodimer 人細胞裂解液 (陽性對照) 鈉(>95%,BR)質量規(guī)格:>95%,BR laurate
Ishikawa 人細胞吡嗪(>98.0%(GC))質量規(guī)格:>98.0%(GC)Pyrazine
特點優(yōu)勢:
1. 特異性:黃桿菌通用PCR檢測試劑盒直銷使用的引物均經過詳盡的生物信息學分析,經過GenBank及自建龐大數據庫的比對,確保所用的每一條引物均為種屬或血清型特異的基因序列區(qū)段,可實現(xiàn)對細菌種屬及血清型的特異檢測,特異性均達到100%。
2. 重現(xiàn)性:該系列所有產品均經過大量實驗菌株的驗證,重現(xiàn)性為100%。
3. 靈敏性:該系列產品可實現(xiàn)對檢測菌的高靈敏檢測,當樣品中細菌的濃度達到103cfu/ml時,可實現(xiàn)對其的直接檢測,無需繁瑣的增菌過程。
4. 實用性:檢測范圍廣,涵蓋了對人體危害較為嚴重的17種及腸道致病菌,可實現(xiàn)對臨床樣品及其他環(huán)境取樣的快速檢測,整個檢測過程為3-4個小時。
5. 優(yōu)勢1:序列資源豐富,除GenBank公布的序列外,公司還進行了大量菌株的序列破譯,從理論上保證所選引物具有良好的保守性和特異性。6. 優(yōu)勢2:該系列試劑盒均經過大量的保守性及特異性實驗驗證,憑借公司擁有的豐富的菌種資源,每一種檢測試劑盒均經過了20余種標準菌株和臨床菌株的保守性驗證及40余種近緣標準菌株和臨床菌株的特異性驗證,確保在使用過程中不會出現(xiàn)任何的假陽性及假陰性報告結果。