產(chǎn)地 | 進(jìn)口、國(guó)產(chǎn) |
品牌 | 帛科 |
貨號(hào) | BKP4461 |
用途 | 公司產(chǎn)品僅用物科研 |
包裝規(guī)格 | 50次 |
純度 | % |
CAS編號(hào) | |
是否進(jìn)口 | 是 |
PCR實(shí)驗(yàn)方法步驟:
方法
1:在冰浴中,按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer
5 μl dNTP mix (2mM)
4 μl 引物1(10pM)
2 μl 引物2(10pM)
2 μl Taq酶 (2U/μl)
1 μl DNA模板(50ng-1μg/μl)
1 μl 加ddH2O至 50 μl
視PCR儀有無熱蓋,不加或添加石蠟油。
2:調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執(zhí)行擴(kuò)增。一般:在93℃預(yù)變性3-5min,進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環(huán)30-35次,在72℃ 保7min。
3:伴放線放線桿菌探針法熒光定量PCR試劑盒結(jié)束反應(yīng),PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測(cè)或-20℃長(zhǎng)期保存。
4:PCR的電泳檢測(cè):如在反應(yīng)管中加有石蠟油,需用100μ進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測(cè)。
產(chǎn)品名稱 | 英文名稱 | 貨號(hào) |
極細(xì)密螺旋體PCR檢測(cè)試劑盒直銷 | Treponema pertenuePCR | BKP4461 |
技術(shù)服務(wù)內(nèi)容:
實(shí)驗(yàn)步驟包括RNA提取、反轉(zhuǎn)錄、PCR和瓊脂糖凝膠電泳,以軟件分析電泳條帶的灰度值(IOD值),通過與內(nèi)參基因的灰度值比較,判斷目的mRNA的相對(duì)表達(dá)量。
特點(diǎn)優(yōu)勢(shì):
1. 特異性:極細(xì)密螺旋體PCR檢測(cè)試劑盒直銷使用的引物均經(jīng)過詳盡的生物信息學(xué)分析,經(jīng)過GenBank及自建龐大數(shù)據(jù)庫(kù)的比對(duì),確保所用的每一條引物均為種屬或血清型特異的基因序列區(qū)段,可實(shí)現(xiàn)對(duì)細(xì)菌種屬及血清型的特異檢測(cè),特異性均達(dá)到100%。
2. 重現(xiàn)性:該系列所有產(chǎn)品均經(jīng)過大量實(shí)驗(yàn)菌株的驗(yàn)證,重現(xiàn)性為100%。
3. 靈敏性:該系列產(chǎn)品可實(shí)現(xiàn)對(duì)檢測(cè)菌的高靈敏檢測(cè),當(dāng)樣品中細(xì)菌的濃度達(dá)到103cfu/ml時(shí),可實(shí)現(xiàn)對(duì)其的直接檢測(cè),無需繁瑣的增菌過程。
4. 實(shí)用性:檢測(cè)范圍廣,涵蓋了對(duì)人體危害較為嚴(yán)重的17種及腸道致病菌,可實(shí)現(xiàn)對(duì)臨床樣品及其他環(huán)境取樣的快速檢測(cè),整個(gè)檢測(cè)過程為3-4個(gè)小時(shí)。
5. 優(yōu)勢(shì)1:序列資源豐富,除GenBank公布的序列外,公司還進(jìn)行了大量菌株的序列破譯,從理論上保證所選引物具有良好的保守性和特異性。6. 優(yōu)勢(shì)2:該系列試劑盒均經(jīng)過大量的保守性及特異性實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證,憑借公司擁有的豐富的菌種資源,每一種檢測(cè)試劑盒均經(jīng)過了20余種標(biāo)準(zhǔn)菌株和臨床菌株的保守性驗(yàn)證及40余種近緣標(biāo)準(zhǔn)菌株和臨床菌株的特異性驗(yàn)證,確保在使用過程中不會(huì)出現(xiàn)任何的假陽(yáng)性及假陰性報(bào)告結(jié)果。本產(chǎn)品只適用于科研,不能用于臨床診斷。
Atractylodin 55290-63-6 中文名:蒼術(shù)素 分子式:C13H10O Humanai-ribosomalPproteinaibody,ARPA/Rib-PELISAKit 人抗核糖體P蛋白抗體(ARPA/Rib-P)ELISA試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝
Crenulatin 63026-02-8 中文名:大花紅天素 分子式:C11H20O6 HumanD-Dimer,D2DELISA試劑盒人D二聚體(D2D)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
1-Monopalmitin 542-44-9 中文名:1-棕櫚酸單甘油酯 分子式:C19H38O4 組織IRAK1激酶活性定量檢測(cè)試劑盒(A/B/C)20次
Ethyl β-D-apiofuranoside 1932405-61-2 中文名: 分子式:C7H14O5 Humanplasmin-aiplasmincomplex,PAPELISAKit人纖溶酶抗纖溶酶復(fù)合物(PAP)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
Myricadenin A 1612239-23-2 中文名: 分子式:C39H40O17 兔子調(diào)節(jié)蛋白(TM)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
兔組織因子途徑抑制物(TFPI)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝 2,2-Diphenylglycine 中文名: 分子式:C14H13NO2 度:98.0%
兔組織因子elisa試劑盒 兔組織因子試劑盒 規(guī)格型號(hào):96T/48T 兔組織因子試劑盒,規(guī)格型號(hào):96T/48T,來源:elisa試劑盒(進(jìn)口分裝),產(chǎn)品別名:兔組織因子試劑盒、兔組織因子eisa試劑盒 保存條件:2-8℃ 保質(zhì)期:6個(gè)月。 Allopurinol 315-30-0 中文名:別嘌醇 分子式:C5H4N4O 度:98.0% 關(guān)鍵詞:
兔組織因子 英文名稱: Rabbit Tissue Factor 規(guī)格: 48T/96T 英文縮寫: TF Allitol 488-44-8 中文名:蒜糖醇 分子式:C6H14O6 度:% 關(guān)鍵詞: 中藥對(duì)照品; 中藥標(biāo)準(zhǔn)品; 植物提取物; 天然產(chǎn)物; 天然產(chǎn)物庫(kù)
兔組織金屬蛋白酶抑制因子1 英文名稱: Rabbit Tissue Inhibitor of Metalloproteinases 1 規(guī)格: 48T/96T 英文縮寫: TIMP-1 Allitol 488-44-8 中文名:蒜糖醇 分子式:C6H14O6
兔子組織因子(TF)ELISA試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝 Allyl cinnamate 1866-31-5 中文名:肉桂酸烯丙酯 分子式:C12H12O2
極細(xì)密螺旋體PCR檢測(cè)試劑盒直銷IL17RA Others Rat 大鼠 IL17RA / IL17R 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) 耐斯糖(標(biāo)準(zhǔn)品)質(zhì)量規(guī)格:含量測(cè)定NISTOSE
原代腎實(shí)質(zhì)細(xì)胞特制無血清添加劑Many types of cells包裝:1ml對(duì)羥基苯乙酮(標(biāo)準(zhǔn)品)質(zhì)量規(guī)格:供含量測(cè)定用4'-Hydroxyacetophenone
OS-732細(xì)胞,細(xì)胞(瘤株) 人細(xì)胞,SiHa細(xì)胞 人脊髓星形膠質(zhì)細(xì)胞總RNAHA-sp NA3,29-二苯甲?;闃侨嗜迹?biāo)準(zhǔn)品)質(zhì)量規(guī)格:含量測(cè)定3,29-Dibenzoyl rarounitriol
非洲綠猴腎細(xì)胞系/IgR;VERO/IgR牛磺豬去氧膽酸(標(biāo)準(zhǔn)品)質(zhì)量規(guī)格:含量測(cè)定TAUROHYODEOXYCHOLIC ACID SALT
FZD5 Others Human 人 Frizzled-5 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) 苦玄參苷X(標(biāo)準(zhǔn)品)質(zhì)量規(guī)格:HPLC≥97%,標(biāo)準(zhǔn)品Picfeltarraenin X
CRT細(xì)胞,神經(jīng)細(xì)胞 曲霉 人海馬趾星形膠質(zhì)細(xì)胞RNAHA-h miRNA5 μg2-Octanol2-辛醇25克AR,97%
RTE(大鼠氣管上皮細(xì)胞) 5×106cells/瓶×21,12-十八烷二醇 1,12-OCTcDqCcNqDIOL 76-73-0
HBL-100(人整合SV40基因的上皮細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2 CL-0361HPAC(人胰腺腺泡上皮癌)5×106cells/瓶×2 水牛皮膚成纖維樣細(xì)胞;WB-S2肖醋錳50%溶液 Mcngcnous nitnctq hqxchydrctq 17141-63-8
人肺粘液上皮樣癌細(xì)胞;NCI-H2921-Pentadecanol1-十五醇500克CP,98%
人表皮角質(zhì)細(xì)胞-(HEK-a) ( 5×105 )LB肉湯LB Broth (Lennox)
反應(yīng)五要素:
參加PCR反應(yīng)的物質(zhì)主要有五種即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物:引物是PCR特異性反應(yīng)的關(guān)鍵,PCR 產(chǎn)物的特異性取決于引物與模板DNA互補(bǔ)的程度。理論上,只要知道任何一段模板DNA序列, 就能按其設(shè)計(jì)互補(bǔ)的寡核苷酸鏈做引物,利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴(kuò)增。設(shè)計(jì)引物應(yīng)遵循以下原則:
①引物長(zhǎng)度: 15-30bp,常用為20bp左右。
②引物擴(kuò)增跨度: 以200-500bp為宜,特定條件下可擴(kuò)增長(zhǎng)至10kb的片段。
③引物堿基:G+C含量以40-60%為宜,G+C太少擴(kuò)增效果不佳,G+C過多易出現(xiàn)非特異條帶。ATGC*隨機(jī)分布,避免5個(gè)以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物內(nèi)部出現(xiàn)二級(jí)結(jié)構(gòu),避免兩條引物間互補(bǔ),特別是3'端的互補(bǔ),否則會(huì)形成引物二聚體,產(chǎn)生非特異的擴(kuò)增條帶。
⑤引物3'端的堿基,特別是最末及倒數(shù)*個(gè)堿基,應(yīng)嚴(yán)格要求配對(duì),以避免因末端堿基不配對(duì)而導(dǎo)致PCR失敗。
⑥引物中有或能加上合適的酶切位點(diǎn), 被擴(kuò)增的靶序列*有適宜的酶切位點(diǎn), 這對(duì)酶切分析或分子克隆很有好處。
⑦引物的特異性:引物應(yīng)與核酸序列數(shù)據(jù)庫(kù)的其它序列無明顯同源性。
引物量:每條引物的濃度0.1~1umol或10~100pmol,以*引物量產(chǎn)生所需要的結(jié)果為好,引物濃度偏高會(huì)引起錯(cuò)配和非特異性擴(kuò)增,且可增加引物之間形成二聚體的機(jī)會(huì)。