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實(shí)驗(yàn)注意事項(xiàng)：
1）RT-PCR可以檢測(cè)組織、細(xì)胞、血液、細(xì)菌等很多材料，不同的樣本有不同要求，實(shí)驗(yàn)前請(qǐng)充分溝通確認(rèn)實(shí)驗(yàn)方案和樣本情況；
2）客戶盡可能提供實(shí)驗(yàn)的背景信息、物種、基因準(zhǔn)確的名稱和ID號(hào)；
3）客戶盡量不要提供DNA或RNA樣品。
4）樣本保存于液氮或干冰，也可以保存于Trizol液中。

實(shí)驗(yàn)方法步驟：
方法
1：在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o(wú)菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer
5 μl     dNTP mix （2mM）
4 μl 引物1（10pM）
2 μl 引物2（10pM）
2 μl     Taq酶 （2U/μl）
1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）
1 μl 加ddH2O至 50 μl

PCR實(shí)驗(yàn)步驟：
①取凍存已裂解的細(xì)胞，室溫放置5分鐘使其完全溶解。
②兩相分離 每1ml的TRIZOL試劑裂解的樣品中加入0.2ml的lvfang，蓋緊管蓋。手動(dòng)劇烈振蕩管體15秒后，15到30℃孵育2到3分鐘。4℃下12000rpm離心15分鐘。離心后混合液體將分為下層的紅色酚lvfang相，中間層以及無(wú)色水相上層。RNA全部被分配于水相中。水相上層的體積大約是勻漿時(shí)加入的TRIZOL試劑的60%。
③RNA沉淀 將水相上層轉(zhuǎn)移到一干凈無(wú)RNA酶的離心管中。加等體積異丙醇混合以沉淀其中的RNA，混勻后15到30℃孵育10分鐘后，于4℃下12000rpm 離心10分鐘。此時(shí)離心前不可見的RNA沉淀將在管底部和側(cè)壁上形成膠狀沉淀塊。
④RNA清洗 移去上清液，每1mlTRIZOL試劑裂解的樣品中加入至少1ml的75%乙醇(75%乙醇用DEPCH2O配制)，清洗RNA沉淀?；靹蚝螅?span>4℃下7000rpm離心5分鐘。
⑤RNA干燥 小心吸去大部分乙醇溶液，使RNA沉淀在室溫空氣中干燥5-10分鐘。
⑥溶解RNA沉淀 溶解RNA時(shí)，先加入無(wú)RNA酶的水40μl用槍反復(fù)吹打幾次，使其完全溶解，獲得的RNA溶液保存于-80℃待用。 1)紫外吸收法測(cè)定先用稀釋用的TE溶液將分光光度計(jì)調(diào)零。然后取少量RNA溶液用TE稀釋(1:100)后，讀取其在分光光度計(jì)260nm和280nm處的吸收值，測(cè)定RNA溶液 濃度和純度。
使用方法：
一、樣品采集：
1、食品樣品：樣品的采集與預(yù)培養(yǎng)按照樣品的采集與預(yù)培養(yǎng)按照菌檢驗(yàn)要求進(jìn)行。
2、血液樣品：用無(wú)菌注射器抽取受檢者血2mL，注入無(wú)菌EDTA2Na(或檸檬酸鈉)抗凝管，立即混勻。
3、糞便樣品：取糞便置于滅菌的收集管中送檢。
4、病灶部位樣品：取部位新鮮滲出物、粘液膿血送檢。
一、稀釋 PCR 陽(yáng)性對(duì)照（以 10E2-10E7 拷貝/μL 這 6 個(gè) 10 倍稀釋度為例）
1. 注意：由于標(biāo)準(zhǔn)品濃度非常高，因此下列稀釋操作一定要在獨(dú)立的區(qū)域進(jìn)行，千萬(wàn)不能污染樣品或本試劑盒的其他成分）。為增加產(chǎn)品穩(wěn)定性和避免擴(kuò)散病原，本產(chǎn)品不提供活體樣品做陽(yáng)性對(duì)照，只提供可以直接使用的 DNA 片段作為陽(yáng)性對(duì)照。
2. 標(biāo)記 6 個(gè)離心管，分別為 7，6，5，4，3，2。
3. 用帶芯槍頭分別加入 45 μL 熒光 PCR 專用模板稀釋液（用帶芯槍頭，下同）。
4. 在 7 號(hào)管中加入 5 μL 1×10E8 拷貝/μL 的陽(yáng)性對(duì)照，充分震蕩 1 分鐘，得1×10E7 拷貝/μL 的陽(yáng)性對(duì)照。放冰上待用。
5. 換槍頭，在 6 號(hào)管中加入 5 μL 1×10E7 拷貝/μL 的陽(yáng)性對(duì)照(上步稀釋所得)，充分震蕩 1 分鐘，得 1×10E6 拷貝/μL 的陽(yáng)性對(duì)照。放冰上待用
6. 換槍頭，在 5 號(hào)管中加入 5 μL 1×10E6 拷貝/μL 的陽(yáng)性對(duì)照到 5 號(hào)管中，充分震蕩 1 分鐘，得 1×10E5 拷貝/μL 的陽(yáng)性對(duì)照。放冰上待用。
7. 重復(fù)上面的操作直到得到 6 個(gè)稀釋度的陽(yáng)性對(duì)照。放冰上待用。

實(shí)時(shí)熒光定量PCR（quantitative real-time PCR，qPCR）是指在PCR反應(yīng)體系中加入熒光基團(tuán)，利用熒光信號(hào)積累實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)整個(gè)PCR進(jìn)程，*通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)曲線對(duì)未知模板進(jìn)行定量分析的方法。實(shí)時(shí)熒光定量PCR的化學(xué)原理包括探針類和非探針類兩類，探針類是利用與靶細(xì)胞序列特異性雜交的探針來(lái)指示擴(kuò)增產(chǎn)物的增加，非探針類是利用熒光染料或者特異性設(shè)計(jì)的引物來(lái)指示擴(kuò)增的增加。運(yùn)用該技術(shù)可以對(duì)DNA、RNA樣品進(jìn)行定量（包括*定量和相對(duì)定量）和定性分析。
主要服務(wù)：DNA或RNA的*定量分析、基因表達(dá)差異分析、基因分型。
主要技術(shù)：引物設(shè)計(jì)、RNA提取、cDNA合成、qPCR

牛腎細(xì)胞;MDBK(BVDV-free) 鼠胚胎成纖維細(xì)胞，PA317細(xì)胞 MLA-144細(xì)胞，長(zhǎng)臂猿瘤AMPSO奎諾二甲基酯5克FMP，96%

EB病毒轉(zhuǎn)化的人B細(xì)胞(拉祜族);KM94062,2′-聯(lián)-雙(3-... ABTS diammonium salt,≥98% 30931-67-0 1G 通用試劑

ELANE Others Mouse 小鼠 Neuophil Elastase / ELANE / ELA2 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) 言醋胍 GUcNIDINqxy7noCHLORIDq1920-1-1

CL-0056CCD-1095Sk(人浸潤(rùn)性導(dǎo)管癌旁皮膚細(xì)胞)5×106cells/瓶×2xy7noxynaphtholblue色酚蘭100克BR，1mg/ml

LTA4H Others Human 人 Leukoiene A4 Hydrolase / LTA4H 桿狀病毒-昆蟲細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照)124-02-7二1丙基胺Diellylemine
膀胱成纖維細(xì)胞Many types of cells包裝：5 × 105方(1ml)辛基三甲基氯化銨;八烷基三甲基氯化銨Trimethyloctylammonium chloride 質(zhì)量規(guī)格：>99%,BR

NEK7 Others Human  NEK7 桿狀病毒-昆蟲細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) DMSDMS質(zhì)量規(guī)格：BR

EB病毒轉(zhuǎn)化的B細(xì)胞;KMY1022D-正亮氨酸(>99%,BC)D-Norleucine質(zhì)量規(guī)格：>99%,BC

ZR-75-1細(xì)胞，癌細(xì)胞 轉(zhuǎn)基因細(xì)胞系,CNE1-lmp\l細(xì)胞 CL-0309TG-905(腦膠質(zhì)母細(xì)胞瘤細(xì)胞)5×106cells/瓶×2鹽酸多巴胺Dopamine 質(zhì)量規(guī)格：>98%,BR

中國(guó)倉(cāng)鼠卵巢細(xì)胞(亞系克隆);CHO 1beta9,12.5 Clone 36DSTDST質(zhì)量規(guī)格：BR
小鼠系;LA795腎上腺色腙（卡洛）標(biāo)準(zhǔn)品Carbazochrome質(zhì)量規(guī)格：供檢查用

羊膜上皮細(xì)胞(HAEpic)( 5×105 )吡拉西坦（標(biāo)準(zhǔn)品）Piracetam質(zhì)量規(guī)格：含量測(cè)定

CM-R120大鼠角膜上皮細(xì)胞完全培養(yǎng)基100mL（標(biāo)準(zhǔn)品）Furazabol質(zhì)量規(guī)格：UV法含量測(cè)定

小鼠胚胎成纖維細(xì)胞;3T3-L1 小鼠成纖維細(xì)胞完全培養(yǎng)基 100mL乙水楊胺（標(biāo)準(zhǔn)品）2-Ethoxybenzamide質(zhì)量規(guī)格：含量測(cè)定

海馬神經(jīng)元 Human枸櫞酸（標(biāo)準(zhǔn)品）Citric acid monohydrate質(zhì)量規(guī)格：含量測(cè)定
人卵巢腺癌細(xì)胞;SK-OV-3地西他濱/ 5-氮雜-2'-脫氧胞嘧啶核苷Decitabine質(zhì)量規(guī)格：>99.5%,BR,可用于細(xì)胞培養(yǎng)

APCS Others Human 人 Serum amyloid P compone / APCS / SAP 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) 地西他濱/ 5-氮雜-2'-脫氧胞嘧啶核苷（標(biāo)準(zhǔn)品）Decitabine質(zhì)量規(guī)格：HPLC>98%,標(biāo)準(zhǔn)品

兔脂肪間質(zhì)干細(xì)胞 Rabbit adipose derived mesenchymal stem cells5-氮雜-2'-脫氧胞嘧啶核苷5-Aza-2′-deoxycytidine質(zhì)量規(guī)格：>97%,進(jìn)分sigma貨號(hào)A3656

BE(2)-M17細(xì)胞，人神經(jīng)母細(xì)胞瘤細(xì)胞 寄生曲霉 293來(lái)源病毒包裝細(xì)胞;ΦA醋酸德舍瑞林Deslorelin Acetate質(zhì)量規(guī)格：>99%,BR

SUP-B15(人Ph+急淋細(xì)胞系) 5×106cells/瓶×2去氨加壓素;去氨壓素Desmopressin Acetate質(zhì)量規(guī)格：>98%,BR,醋酸鹽形式

豬病毒 I 型（偽病毒）PCR試劑盒本產(chǎn)品只適用于科研，不能用于臨床診斷。