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實驗注意事項：
1）RT-PCR可以檢測組織、細(xì)胞、血液、細(xì)菌等很多材料，不同的樣本有不同要求，實驗前請充分溝通確認(rèn)實驗方案和樣本情況；
2）客戶盡可能提供實驗的背景信息、物種、基因準(zhǔn)確的名稱和ID號；
3）客戶盡量不要提供DNA或RNA樣品。
4）樣本保存于液氮或干冰，也可以保存于Trizol液中。

實驗方法步驟：
方法
1：在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。 
10×PCR buffer 
5 μl     dNTP mix （2mM） 
4 μl     引物1（10pM） 
2 μl     引物2（10pM） 
2 μl     Taq酶 （2U/μl） 
1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl） 
1 μl      加ddH2O至 50 μl 

PCR實驗步驟：
①取凍存已裂解的細(xì)胞，室溫放置5分鐘使其完全溶解。
②兩相分離 每1ml的TRIZOL試劑裂解的樣品中加入0.2ml的lvfang，蓋緊管蓋。手動劇烈振蕩管體15秒后，15到30℃孵育2到3分鐘。4℃下12000rpm離心15分鐘。離心后混合液體將分為下層的紅色酚lvfang相，中間層以及無色水相上層。RNA全部被分配于水相中。水相上層的體積大約是勻漿時加入的TRIZOL試劑的60%。
③RNA沉淀 將水相上層轉(zhuǎn)移到一干凈無RNA酶的離心管中。加等體積異丙醇混合以沉淀其中的RNA，混勻后15到30℃孵育10分鐘后，于4℃下12000rpm 離心10分鐘。此時離心前不可見的RNA沉淀將在管底部和側(cè)壁上形成膠狀沉淀塊。
④RNA清洗 移去上清液，每1mlTRIZOL試劑裂解的樣品中加入至少1ml的75%乙醇(75%乙醇用DEPCH2O配制)，清洗RNA沉淀。混勻后，4℃下7000rpm離心5分鐘。
⑤RNA干燥 小心吸去大部分乙醇溶液，使RNA沉淀在室溫空氣中干燥5-10分鐘。
⑥溶解RNA沉淀 溶解RNA時，先加入無RNA酶的水40μl用槍反復(fù)吹打幾次，使其完全溶解，獲得的RNA溶液保存于-80℃待用。 1)紫外吸收法測定先用稀釋用的TE溶液將分光光度計調(diào)零。然后取少量RNA溶液用TE稀釋(1:100)后，讀取其在分光光度計260nm和280nm處的吸收值，測定RNA溶液 濃度和純度。
使用方法：
一、樣品采集：
1、食品樣品：樣品的采集與預(yù)培養(yǎng)按照樣品的采集與預(yù)培養(yǎng)按照菌檢驗要求進行。
2、血液樣品：用無菌注射器抽取受檢者血2mL，注入無菌EDTA2Na(或檸檬酸鈉)抗凝管，立即混勻。
3、糞便樣品：取糞便置于滅菌的收集管中送檢。
4、病灶部位樣品：取部位新鮮滲出物、粘液膿血送檢。
一、稀釋 PCR 陽性對照（以 10E2-10E7 拷貝/μL 這 6 個 10 倍稀釋度為例）
1. 注意：由于標(biāo)準(zhǔn)品濃度非常高，因此下列稀釋操作一定要在獨立的區(qū)域進行，千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分）。為增加產(chǎn)品穩(wěn)定性和避免擴散病原，本產(chǎn)品不提供活體樣品做陽性對照，只提供可以直接使用的 DNA 片段作為陽性對照。
2. 標(biāo)記 6 個離心管，分別為 7，6，5，4，3，2。
3. 用帶芯槍頭分別加入 45 μL 熒光 PCR 專用模板稀釋液（用帶芯槍頭，下同）。
4. 在 7 號管中加入 5 μL 1×10E8 拷貝/μL 的陽性對照，充分震蕩 1 分鐘，得1×10E7 拷貝/μL 的陽性對照。放冰上待用。
5. 換槍頭，在 6 號管中加入 5 μL 1×10E7 拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得)，充分震蕩 1 分鐘，得 1×10E6 拷貝/μL 的陽性對照。放冰上待用
6. 換槍頭，在 5 號管中加入 5 μL 1×10E6 拷貝/μL 的陽性對照到 5 號管中，充分震蕩 1 分鐘，得 1×10E5 拷貝/μL 的陽性對照。放冰上待用。
7. 重復(fù)上面的操作直到得到 6 個稀釋度的陽性對照。放冰上待用。

實時熒光定量PCR（quantitative real-time PCR，qPCR）是指在PCR反應(yīng)體系中加入熒光基團，利用熒光信號積累實時監(jiān)測整個PCR進程，*通過標(biāo)準(zhǔn)曲線對未知模板進行定量分析的方法。實時熒光定量PCR的化學(xué)原理包括探針類和非探針類兩類，探針類是利用與靶細(xì)胞序列特異性雜交的探針來指示擴增產(chǎn)物的增加，非探針類是利用熒光染料或者特異性設(shè)計的引物來指示擴增的增加。運用該技術(shù)可以對DNA、RNA樣品進行定量（包括*定量和相對定量）和定性分析。
主要服務(wù)：DNA或RNA的*定量分析、基因表達差異分析、基因分型。
主要技術(shù)：引物設(shè)計、RNA提取、cDNA合成、qPCR

HAVCR2 Others Human 人 TIMD3 / TIM3 / HAVCR2 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) NZ-AMINEA酶水解酪素細(xì)菌學(xué)級粉末COLD不sigma

CL-0151MDA-MB-435S(人導(dǎo)管癌細(xì)胞)5×106cells/瓶×2鈦鐵試劑 Tiron,>98.0% 149-45-1 25G 通用試劑

CD3E Others Cynomolgus 食蟹猴 CD3e / CD3 epsilon 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) GDX-502 GDX-502

小鼠肝動脈內(nèi)皮細(xì)胞完全培養(yǎng)基 100mLCreatinine肌11克BR，99%

HCAEC人內(nèi)皮細(xì)胞 HCAEC in human coronary artery endothelial cells ECM(Sicencell Cat#1001)扶化物NA
低侵襲性脈絡(luò)膜色素素瘤細(xì)胞;OCM-1ABYL719BYL-719質(zhì)量規(guī)格：>98%,選擇性的PI3Kα抑制劑

CSF2 Others Human  GM-CSF / CSF2 細(xì)胞裂解液 (陽性對照) VRT752271VRT-752271.HCl質(zhì)量規(guī)格：>98%,鹽酸鹽形式,蛋白激酶抑制劑

CoC2(懸浮) 奧拉甲磺酸鹽Obatoclax Mesylate;GX15-070質(zhì)量規(guī)格：≥98%,Bcl-2拮抗劑

COLO 205細(xì)胞 COLO 205 human colon cancer cells 1640+10% FBS羊藿素(標(biāo)準(zhǔn)品)Icaritin質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥98%，標(biāo)準(zhǔn)品

TNFSF8 Protein Rat 重組大鼠 CD153 / CD30L / TNFSF8 蛋白銀杏內(nèi)酯A(標(biāo)準(zhǔn)品)Ginkgolide A質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥98%，標(biāo)準(zhǔn)品
星形膠質(zhì)細(xì)胞培養(yǎng)基AM溴藍(lán)[pH指示劑]Bromochlorophenol Blue質(zhì)量規(guī)格：pH指示劑

APCDD1 Others Human  APCDD1 細(xì)胞裂解液 (陽性對照) 乙基橙[pH指示劑]Ethyl Orange質(zhì)量規(guī)格：pH指示劑

B母細(xì)胞;HMy2.CIR4-乙氧基橘紅鹽酸鹽(>95.0%(T))4-Ethoxychrysoidine 質(zhì)量規(guī)格：>95.0%(T)

正常大鼠腎細(xì)胞(EGF受體陽性);NRK49F 轉(zhuǎn)移*腺癌細(xì)胞，AsPC-1細(xì)胞 McCoy細(xì)胞，小鼠成纖維細(xì)胞系DAABD-Cl [=4-[2-(二甲氨基)乙氨基磺酰]-7-氯-2,1,3-苯并惡二唑DAABD-Cl [=4-[2-(Dimethylamino)ethylaminosulfonyl]-7-chloro-2,1,3-benzoxadiazole]質(zhì)量規(guī)格：用于蛋白質(zhì)組分析，用于高效液相色譜標(biāo)記，熒光染料，用于質(zhì)譜的衍生化試劑

5-8F, 高轉(zhuǎn)移細(xì)胞系 Human2,3-萘二醛(>99.0%(GC))2,3-Naphthalenedialdehyde質(zhì)量規(guī)格：>99.0%(GC)
雜交瘤(B類);Z1510A2G6A2C7伐地那非-d5Vardenafil-d5質(zhì)量規(guī)格：美國進口

小鼠誘導(dǎo)性多潛能干細(xì)胞;PUMC-mips-A4 胰蛋白酶(含10mL 酶解緩沖液) 1mL鹽酸貝他定Bestatin 質(zhì)量規(guī)格：美國進口

C2C12, 小鼠肌原細(xì)胞 MouseN-去甲基二鹽酸三氟拉嗪N-Desmethyl Trifluoperazine Di質(zhì)量規(guī)格：美國進口

TNFRSF10A Others Human 人 TNFRSF10A / CD261 / APO2 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) 雙硫侖-d20Disulfiram-d20質(zhì)量規(guī)格：美國進口

人內(nèi)根鞘細(xì)胞HHIRSC脫氧膽酸鈉鹽Deoxycholic Acid,  Salt質(zhì)量規(guī)格：美國進口

豬托克特諾病毒2型（豬細(xì)環(huán)病毒2型）染料法熒光定量PCR試劑盒本產(chǎn)品只適用于科研，不能用于臨床診斷。