產(chǎn)地 | 進(jìn)口、國產(chǎn) |
品牌 | 帛科 |
貨號 | BK-P64750 |
用途 | 公司產(chǎn)品僅用于科研 |
包裝規(guī)格 | 50次 |
純度 | % |
CAS編號 | |
是否進(jìn)口 | 是 |
實(shí)驗(yàn)注意事項(xiàng):
1)RT-PCR可以檢測組織、細(xì)胞、血液、細(xì)菌等很多材料,不同的樣本有不同要求,實(shí)驗(yàn)前請充分溝通確認(rèn)實(shí)驗(yàn)方案和樣本情況;
2)客戶盡可能提供實(shí)驗(yàn)的背景信息、物種、基因準(zhǔn)確的名稱和ID號;
3)客戶盡量不要提供DNA或RNA樣品。
4)樣本保存于液氮或干冰,也可以保存于Trizol液中。
產(chǎn)品名稱 |
規(guī)格 |
貨號 |
JC病毒染料法熒光定量PCR試劑盒 |
50次 |
BK-P64750 |
實(shí)驗(yàn)方法步驟:
方法
1:在冰浴中,按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer
5 μl dNTP mix (2mM)
4 μl 引物1(10pM)
2 μl 引物2(10pM)
2 μl Taq酶 (2U/μl)
1 μl DNA模板(50ng-1μg/μl)
1 μl 加ddH2O至 50 μl
PCR實(shí)驗(yàn)步驟:
①取凍存已裂解的細(xì)胞,室溫放置5分鐘使其完全溶解。
②兩相分離 每1ml的TRIZOL試劑裂解的樣品中加入0.2ml的lvfang,蓋緊管蓋。手動劇烈振蕩管體15秒后,15到30℃孵育2到3分鐘。4℃下12000rpm離心15分鐘。離心后混合液體將分為下層的紅色酚lvfang相,中間層以及無色水相上層。RNA全部被分配于水相中。水相上層的體積大約是勻漿時(shí)加入的TRIZOL試劑的60%。
③RNA沉淀 將水相上層轉(zhuǎn)移到一干凈無RNA酶的離心管中。加等體積異丙醇混合以沉淀其中的RNA,混勻后15到30℃孵育10分鐘后,于4℃下12000rpm 離心10分鐘。此時(shí)離心前不可見的RNA沉淀將在管底部和側(cè)壁上形成膠狀沉淀塊。
④RNA清洗 移去上清液,每1mlTRIZOL試劑裂解的樣品中加入至少1ml的75%乙醇(75%乙醇用DEPCH2O配制),清洗RNA沉淀?;靹蚝?,4℃下7000rpm離心5分鐘。
⑤RNA干燥 小心吸去大部分乙醇溶液,使RNA沉淀在室溫空氣中干燥5-10分鐘。
⑥溶解RNA沉淀 溶解RNA時(shí),先加入無RNA酶的水40μl用槍反復(fù)吹打幾次,使其完全溶解,獲得的RNA溶液保存于-80℃待用。 1)紫外吸收法測定先用稀釋用的TE溶液將分光光度計(jì)調(diào)零。然后取少量RNA溶液用TE稀釋(1:100)后,讀取其在分光光度計(jì)260nm和280nm處的吸收值,測定RNA溶液
濃度和純度。
使用方法:
一、樣品采集:
1、食品樣品:樣品的采集與預(yù)培養(yǎng)按照樣品的采集與預(yù)培養(yǎng)按照菌檢驗(yàn)要求進(jìn)行。
2、血液樣品:用無菌注射器抽取受檢者血2mL,注入無菌EDTA2Na(或檸檬酸鈉)抗凝管,立即混勻。
3、糞便樣品:取糞便置于滅菌的收集管中送檢。
4、病灶部位樣品:取部位新鮮滲出物、粘液膿血送檢。
一、稀釋 PCR 陽性對照(以 10E2-10E7 拷貝/μL 這 6 個(gè) 10 倍稀釋度為例)
1. 注意:由于標(biāo)準(zhǔn)品濃度非常高,因此下列稀釋操作一定要在獨(dú)立的區(qū)域進(jìn)行,千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分)。為增加產(chǎn)品穩(wěn)定性和避免擴(kuò)散病原,本產(chǎn)品不提供活體樣品做陽性對照,只提供可以直接使用的 DNA 片段作為陽性對照。
2. 標(biāo)記 6 個(gè)離心管,分別為 7,6,5,4,3,2。
3. 用帶芯槍頭分別加入 45 μL 熒光 PCR 專用模板稀釋液(用帶芯槍頭,下同)。
4. 在 7 號管中加入 5 μL 1×10E8 拷貝/μL 的陽性對照,充分震蕩 1 分鐘,得1×10E7 拷貝/μL 的陽性對照。放冰上待用。
5. 換槍頭,在 6 號管中加入 5 μL 1×10E7 拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得),充分震蕩 1 分鐘,得 1×10E6 拷貝/μL 的陽性對照。放冰上待用
6. 換槍頭,在 5 號管中加入 5 μL 1×10E6 拷貝/μL 的陽性對照到 5 號管中,充分震蕩 1 分鐘,得 1×10E5 拷貝/μL 的陽性對照。放冰上待用。
7. 重復(fù)上面的操作直到得到 6 個(gè)稀釋度的陽性對照。放冰上待用。
實(shí)時(shí)熒光定量PCR(quantitative real-time PCR,qPCR)是指在PCR反應(yīng)體系中加入熒光基團(tuán),利用熒光信號積累實(shí)時(shí)監(jiān)測整個(gè)PCR進(jìn)程,*通過標(biāo)準(zhǔn)曲線對未知模板進(jìn)行定量分析的方法。實(shí)時(shí)熒光定量PCR的化學(xué)原理包括探針類和非探針類兩類,探針類是利用與靶細(xì)胞序列特異性雜交的探針來指示擴(kuò)增產(chǎn)物的增加,非探針類是利用熒光染料或者特異性設(shè)計(jì)的引物來指示擴(kuò)增的增加。運(yùn)用該技術(shù)可以對DNA、RNA樣品進(jìn)行定量(包括*定量和相對定量)和定性分析。
主要服務(wù):DNA或RNA的*定量分析、基因表達(dá)差異分析、基因分型。
主要技術(shù):引物設(shè)計(jì)、RNA提取、cDNA合成、qPCR
人表皮色素細(xì)胞-淺色素裂解物HELM-l LIndigocarmine5,5′-靛藍(lán)二磺酸二鈉鹽10毫升USP級,98%
新生牛眼晶體上皮細(xì)胞;NBLE 人細(xì)胞,SW579細(xì)胞 RIN-m5F細(xì)胞,小鼠β胰島素瘤細(xì)胞 (細(xì)胞級) (≥99%, cell culture... 100ML 通用試劑
人膀胱上皮永生化細(xì)胞;SV-HUC-1N-芴氧羰?;?span>-D-炳安醋 FMOC-D-clcninq 79990-12-1
EPHA4 Others Human 人 EPHA4 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) 羥丙基倍他環(huán)糊精,英文名或英文縮寫:HPCD,級別:超,99%,規(guī)格:1毫克
CL-0104HEp-2(人喉表皮樣癌細(xì)胞)5×106cells/瓶×2硅酮 GE SE-54NA
CL-0112HMy2.CIR(B母細(xì)胞)5×106cells/瓶×2組雙鹽酸鹽,英文名或英文縮寫:Histamine dixy7nochloride,級別:BR,99%,規(guī)格:1克
DDC Others Human DOPA Decarboxylase / DDC 桿狀病毒-昆蟲細(xì)胞裂解液 (陽性對照) L-高脯酸 L-Pipecolic acid,99% 3105-95-1 50MG 通用試劑
毛細(xì)胞裂解物HHDPCL草醋高鐵銨 Fqrric cmmonium oxclctq trihydrctq1368-4-3
EB-3[EB3]細(xì)胞,樣Butt瘤細(xì)胞 腎透明細(xì)胞腺癌細(xì)胞,786-O細(xì)胞 前脂肪細(xì)胞Many types of cells包裝:5 × 105方(1ml)2'-nitnoacetanilide鄰硝基乙酰本胺500毫克BR
兔間變表皮鱗株;VX2枸櫞酸鹽培養(yǎng)基NA
雜交瘤(B類);Z1510A2G6A2F8低粘度羥丙基纖維素HPC, hydroxypropyl cellulose質(zhì)量規(guī)格:150~400
mpa.s,BR
Bel-7404細(xì)胞,細(xì)胞 皮膚成纖維細(xì)胞,CCC-HSF-1細(xì)胞 中國倉鼠卵巢細(xì)胞;CHOL(+)1酸二鈉二水(>98%,BC )L(+) tartrate dihydrate質(zhì)量規(guī)格:>98%,BC
L1210(小鼠細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2鹽酸吡哆胺(>98%,BC )Pyridoxamine, di質(zhì)量規(guī)格:>98%,BC
Promocell C-28012 Mesenchymal Stem CellChondrogenic Differe. Medium, 間充質(zhì)干細(xì)胞軟骨分化培養(yǎng)基(即用型) 100ml水楊酸鈉(>99%,USP) salicylate質(zhì)量規(guī)格:>99%,USP
成纖維細(xì)胞總RNAHLF NA3-(環(huán)己氨基 )-1-丙磺酸鈉(分子生物學(xué)級)CAPS, salt質(zhì)量規(guī)格:>99%,分子生物學(xué)級
CA12 Others Mouse 小鼠 Ca12 / Car12 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) 恩諾沙星(標(biāo)準(zhǔn)品)Enrofloxacin 質(zhì)量規(guī)格:HPLC>98%,標(biāo)準(zhǔn)品
人細(xì)胞;SF17鹽酸恩諾沙星Enrofloxacin HCL質(zhì)量規(guī)格:>98.5%
人臍帶間葉干細(xì)胞(臍帶)(HUMSC) (5×105)鹽酸恩諾沙星(標(biāo)準(zhǔn)品)Enrofloxacin HCL質(zhì)量規(guī)格:HPLC>98%,標(biāo)準(zhǔn)品
CM-R008大鼠成纖維細(xì)胞完全培養(yǎng)基100mL佐米曲普坦Zolmitriptan質(zhì)量規(guī)格:>99%
小鼠腎足細(xì)胞;Mouse podocyte 小鼠肝內(nèi)膽管上皮細(xì)胞完全培養(yǎng)基 100mL胸腺肽alpha 1Thymosin alpha 1
產(chǎn)品名稱
規(guī)格
貨號
JC病毒染料法熒光定量PCR試劑盒
Acetate質(zhì)量規(guī)格:BR,進(jìn)分
本產(chǎn)品只適用于科研,不能用于臨床診斷。