產(chǎn)地 | 進口、國產(chǎn) |
品牌 | 帛科 |
貨號 | BK-P64681 |
用途 | 公司產(chǎn)品僅用于科研 |
包裝規(guī)格 | 50次 |
純度 | % |
CAS編號 | |
是否進口 | 是 |
實驗注意事項:
1)RT-PCR可以檢測組織、細胞、血液、細菌等很多材料,不同的樣本有不同要求,實驗前請充分溝通確認實驗方案和樣本情況;
2)客戶盡可能提供實驗的背景信息、物種、基因準(zhǔn)確的名稱和ID號;
3)客戶盡量不要提供DNA或RNA樣品。
4)樣本保存于液氮或干冰,也可以保存于Trizol液中。
產(chǎn)品名稱 |
規(guī)格 |
貨號 |
雙歧桿菌屬通用探針法熒光定量PCR試劑盒 |
50次 |
BK-P64681 |
實驗方法步驟:
方法
1:在冰浴中,按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer
5 μl dNTP mix (2mM)
4 μl 引物1(10pM)
2 μl 引物2(10pM)
2 μl Taq酶 (2U/μl)
1 μl DNA模板(50ng-1μg/μl)
1 μl 加ddH2O至 50 μl
PCR實驗步驟:
①取凍存已裂解的細胞,室溫放置5分鐘使其完全溶解。
②兩相分離 每1ml的TRIZOL試劑裂解的樣品中加入0.2ml的lvfang,蓋緊管蓋。手動劇烈振蕩管體15秒后,15到30℃孵育2到3分鐘。4℃下12000rpm離心15分鐘。離心后混合液體將分為下層的紅色酚lvfang相,中間層以及無色水相上層。RNA全部被分配于水相中。水相上層的體積大約是勻漿時加入的TRIZOL試劑的60%。
③RNA沉淀 將水相上層轉(zhuǎn)移到一干凈無RNA酶的離心管中。加等體積異丙醇混合以沉淀其中的RNA,混勻后15到30℃孵育10分鐘后,于4℃下12000rpm 離心10分鐘。此時離心前不可見的RNA沉淀將在管底部和側(cè)壁上形成膠狀沉淀塊。
④RNA清洗 移去上清液,每1mlTRIZOL試劑裂解的樣品中加入至少1ml的75%乙醇(75%乙醇用DEPCH2O配制),清洗RNA沉淀。混勻后,4℃下7000rpm離心5分鐘。
⑤RNA干燥 小心吸去大部分乙醇溶液,使RNA沉淀在室溫空氣中干燥5-10分鐘。
⑥溶解RNA沉淀 溶解RNA時,先加入無RNA酶的水40μl用槍反復(fù)吹打幾次,使其完全溶解,獲得的RNA溶液保存于-80℃待用。 1)紫外吸收法測定先用稀釋用的TE溶液將分光光度計調(diào)零。然后取少量RNA溶液用TE稀釋(1:100)后,讀取其在分光光度計260nm和280nm處的吸收值,測定RNA溶液
濃度和純度。
使用方法:
一、樣品采集:
1、食品樣品:樣品的采集與預(yù)培養(yǎng)按照樣品的采集與預(yù)培養(yǎng)按照菌檢驗要求進行。
2、血液樣品:用無菌注射器抽取受檢者血2mL,注入無菌EDTA2Na(或檸檬酸鈉)抗凝管,立即混勻。
3、糞便樣品:取糞便置于滅菌的收集管中送檢。
4、病灶部位樣品:取部位新鮮滲出物、粘液膿血送檢。
一、稀釋 PCR 陽性對照(以 10E2-10E7 拷貝/μL 這 6 個 10 倍稀釋度為例)
1. 注意:由于標(biāo)準(zhǔn)品濃度非常高,因此下列稀釋操作一定要在獨立的區(qū)域進行,千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分)。為增加產(chǎn)品穩(wěn)定性和避免擴散病原,本產(chǎn)品不提供活體樣品做陽性對照,只提供可以直接使用的 DNA 片段作為陽性對照。
2. 標(biāo)記 6 個離心管,分別為 7,6,5,4,3,2。
3. 用帶芯槍頭分別加入 45 μL 熒光 PCR 專用模板稀釋液(用帶芯槍頭,下同)。
4. 在 7 號管中加入 5 μL 1×10E8 拷貝/μL 的陽性對照,充分震蕩 1 分鐘,得1×10E7 拷貝/μL 的陽性對照。放冰上待用。
5. 換槍頭,在 6 號管中加入 5 μL 1×10E7 拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得),充分震蕩 1 分鐘,得 1×10E6 拷貝/μL 的陽性對照。放冰上待用
6. 換槍頭,在 5 號管中加入 5 μL 1×10E6 拷貝/μL 的陽性對照到 5 號管中,充分震蕩 1 分鐘,得 1×10E5 拷貝/μL 的陽性對照。放冰上待用。
7. 重復(fù)上面的操作直到得到 6 個稀釋度的陽性對照。放冰上待用。
實時熒光定量PCR(quantitative real-time PCR,qPCR)是指在PCR反應(yīng)體系中加入熒光基團,利用熒光信號積累實時監(jiān)測整個PCR進程,*通過標(biāo)準(zhǔn)曲線對未知模板進行定量分析的方法。實時熒光定量PCR的化學(xué)原理包括探針類和非探針類兩類,探針類是利用與靶細胞序列特異性雜交的探針來指示擴增產(chǎn)物的增加,非探針類是利用熒光染料或者特異性設(shè)計的引物來指示擴增的增加。運用該技術(shù)可以對DNA、RNA樣品進行定量(包括*定量和相對定量)和定性分析。
主要服務(wù):DNA或RNA的*定量分析、基因表達差異分析、基因分型。
主要技術(shù):引物設(shè)計、RNA提取、cDNA合成、qPCR
總抗氧化能力檢測試劑盒 TACA3-(N-啉)丙磺酸shēng huà shì jì容量:保存:-20℃250ug/支
牛胚氣管細胞;EB (NBL-4) 人臍內(nèi)皮細胞株,ECV304細胞 TC-1細胞,HPVl6 E6、E7和ras基因共轉(zhuǎn)化的C57BL/C(H-2b)小鼠肺上皮細胞1-基本并咪坐 99% 1-MqTHYLBqNZIMIDcZOLq 163-83-3
EB病毒轉(zhuǎn)化的人B細胞(傣族);KM9405蛋白酶測試盒-胃蛋白酶測試盒shēng huà shì jì容量:RT20 個/包
MMP2 Others Human 人 MMP-2 / CLG4A 人細胞裂解液 (陽性對照) FORMICACID義酸(酸)*淡黃色透明液體RT不sigma
CL-0064CoC1(人細胞)5×106cells/瓶×21562-94-34,4-氧化偶氮本4,4'-AZOXYANISOLE
HT-29細胞 HT-29 human
colon cancer cells McCoy's *+10%FBS克羅米通Crotamiton 質(zhì)量規(guī)格:>97%,BR
TNFSF12 Protein Cynomolgus 重組食蟹猴 / TNFSF12 蛋白 (Fc 標(biāo)簽)L-組氨酸L-Histidine質(zhì)量規(guī)格:>99%,BR
虹狀體上皮細胞 (HIPEpiC)( 5×105 ) HUM, 正常主動脈平滑肌細胞 HumanL-丙氨酸L-Alanine質(zhì)量規(guī)格:>99%,BR
T瘤細胞Jurkat亞系;Jurkat77L-酪氨酸L-Tyrosine質(zhì)量規(guī)格:>99%,BR
STC2 Others Human STC2 / Stanniocalcin 2 細胞裂解液 (陽性對照) L-酪氨酸(標(biāo)準(zhǔn)品)L-Tyrosine質(zhì)量規(guī)格:>98%,標(biāo)準(zhǔn)品
小鼠單核巨噬細胞細胞;RAW 264.7 [RAW264.7 小鼠管內(nèi)皮細胞完全培養(yǎng)基 100mL四苯硼鈉 tetraphenylboron質(zhì)量規(guī)格:AR
平滑肌細胞 Human磺基水楊酸鈉 sulfosalicylate質(zhì)量規(guī)格:AR
LYPD3 Others Mouse 小鼠 LYPD3 / MIG-C4 細胞裂解液 (陽性對照) 亞硝基紅鹽Nitroso R Salt質(zhì)量規(guī)格:AR
小鼠神經(jīng)母細胞瘤細胞;Neuro-2a [N2a; Neuro-2a]玫瑰紅酸鈉Rhodizonic acid salt質(zhì)量規(guī)格:AR
EPHA2 Others Human EphA2 (aa 585-976) 桿狀病毒-昆蟲細胞裂解液 (陽性對照) 靛藍二磺酸鈉Indigo carmine質(zhì)量規(guī)格:AR
轉(zhuǎn)化細胞 人卵巢成纖維細胞完全培養(yǎng)基 100mL丁草胺標(biāo)準(zhǔn)溶液(0.100mg/ml)Butachlor
solution質(zhì)量規(guī)格:0.100mg/ml
人脈絡(luò)叢成纖維細胞RNAHCPF miRNA5 μg丁草胺(標(biāo)準(zhǔn)品)Butachlor質(zhì)量規(guī)格:分析標(biāo)準(zhǔn)品,95%
KYNU Others Human 人 KYNU / Kynureninase 桿狀病毒-昆蟲細胞裂解液 (陽性對照) 丁草胺標(biāo)準(zhǔn)溶液(100μg/ml,u=4%)Butachlor solution質(zhì)量規(guī)格:100μg/ml,u=4%
犬腎細胞;MDCK(NBL-2)丁草胺標(biāo)準(zhǔn)溶液(10μg/ml,u=7%)Butachlor solution質(zhì)量規(guī)格:10μg/ml,u=7%
U-2 OS細胞,細胞 人二倍體細胞系,KMB-17細胞 小鼠胚胎成纖維細胞;NIH/3T3炔草隆(標(biāo)準(zhǔn)品)Buturon質(zhì)量規(guī)格:分析標(biāo)準(zhǔn)品
雙歧桿菌屬通用探針法熒光定量PCR試劑盒本產(chǎn)品只適用于科研,不能用于臨床診斷。