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上海帛科生物技術(shù)有限公司
   
     
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DH10B 感受態(tài)細胞
起訂量 (瓶)價格
1-102350 /瓶
≥101250 /瓶
  • 品牌:帛科
  • 產(chǎn)地:進口、國產(chǎn)
  • 貨號:BK-G63239
  • 發(fā)布日期: 2021-02-21
  • 更新日期: 2024-12-13
產(chǎn)品詳請
產(chǎn)地 進口、國產(chǎn)
保存條件 低溫冷藏
品牌 帛科
貨號 BK-G63239
用途 產(chǎn)品僅用于科研
組織來源 詳見說明書
細胞形態(tài) 詳見說明書
是否是腫瘤細胞
CAS編號
保質(zhì)期 詳見說明書
器官來源 詳見說明書
免疫類型 詳見說明書
品系 詳見說明書
生長狀態(tài) 詳見說明書
物種來源 詳見說明書
包裝規(guī)格 100ul*10 100ul*50
純度 %
是否進口

細胞培養(yǎng)操作規(guī)程:

一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備:
1)準備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO,貨號21875-091),90%;優(yōu)質(zhì)胎牛血清,10%。
2)培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37℃,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3)凍存液:90%血清,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配,液氮儲存。
二.細胞處理:
1)復(fù)蘇細胞:將含有1mL細胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于凍存管蓋部)搖晃解凍,移入事先準備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。*天換液并檢查細胞密度。
2)細胞傳代:如果細胞密度達80%-90%,即可進行傳代培養(yǎng)。
對于懸浮細胞,傳代可參考以下方法:
方法一:收集細胞,1000RPM,常溫條件下離心5分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,將細胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

規(guī)格參數(shù):

產(chǎn)品名稱:DH10B 感受態(tài)細胞
規(guī)格 :100ul*10 100ul*50
分類:克隆感受態(tài)細胞
用途:生化試劑(用于科研試驗研究)
儲存條件: -70℃保存,必須加干冰運輸。自收貨之日起液氮保存至少一年,-70℃保存至少6個月。
外觀:(性狀) 干冰運輸,單加10kg干冰費
單位: 袋

注意事項:


1. 感受態(tài)細胞*在冰中緩慢融化,插入冰中8分鐘內(nèi)加入目標DNA,不可在冰中放置時間過長,長時間存放會降低轉(zhuǎn)化效率。
2. 混入質(zhì)?;蜻B接產(chǎn)物時應(yīng)輕柔操作。
3. 轉(zhuǎn)化高濃度的質(zhì)?;蚋咝实倪B接產(chǎn)物可相應(yīng)減少最終用于涂板的菌量。
同一批感受態(tài)細胞,用含目的片段的T載體質(zhì)粒轉(zhuǎn)化(陽性對照)能長出密密麻麻的菌落,而用另一種載體和目的片段的連接產(chǎn)物轉(zhuǎn)化,卻一個菌都沒長出來,重復(fù)了三次都這樣。請問這是感受態(tài)細胞的制作不過關(guān),還是連接出了問題?哪個可能性大些?
答:應(yīng)該是連接的問題。所有連接反應(yīng)建議同時轉(zhuǎn)化酶切后的質(zhì)粒作為另一個陰性對照,確定酶切是否完全。同時連接前請確定質(zhì)粒和片段濃度達到最小連接量的要求。
感受態(tài)細胞放到-80冰箱了有半年了,還能用來轉(zhuǎn)化質(zhì)粒嗎?
答:如-80冰箱儲存過程中沒有發(fā)生凍融的情況,是可以用來轉(zhuǎn)化的,但是由于凍存時間過長,轉(zhuǎn)化效率會有所下降,如果用于普通的質(zhì)粒重轉(zhuǎn)或TA克隆等高效連接體系也是可以的,如珍貴的樣品請選用較為新鮮的感受態(tài)細胞。

紫蓳靈(標準品)質(zhì)量規(guī)格:HPLC≥98%,標準品Corynoline  人游離雌三醇(FE3)ELISA檢測試劑盒humanfreeEsiol,FE3ELISAKIT 96T/48T  全組織細胞色素C氧化酶活性染色試劑盒10

紫云英苷(標準品)質(zhì)量規(guī)格:HPLC≥98%,標準品Astragaline  大鼠金屬轉(zhuǎn)運蛋白1(MTP1)試劑盒 Rat Metal anspoer Protein 1,MTP1 ELISA Kit  ELISAKitADH/VP/AVP人抗激素/精氨酸加壓素規(guī)格:48T/96T

棕櫚酸(標準品)質(zhì)量規(guī)格:HPLC≥98%,標準品Palmitic acid  英文名稱Ratβ2-GP1Ig(A,G,M)ELISAKit大鼠β2糖蛋白1抗體Ig(A,G,M)(β2-GP1)ELISAKit規(guī)格:96T/48T  大鼠粘蛋白/粘液素5AC(MUC5AC)ELISA試劑盒 ,英文名: MUC5AC ELISA Kit

王不留行黃酮苷(標準品)質(zhì)量規(guī)格:HPLC≥98%,標準品Vaccarin  咖啡阿斯巴塘(aspaame)含量高效液相色譜法定量檢測試劑盒20  人抗胰蛋白酶(AT)ELISA檢測試劑盒HumanAi-ypsin,ATELISAKit 96T/48T

英文名稱MouseIerleukin-4,IL-4ELISAKIT小鼠白介素4(IL-4)規(guī)格:96T/48T  17086-76-9杯莧甾酮品牌  Cyasterone

冰凍切片中性脂質(zhì)蘇丹染色試劑盒50  19773-24-1貝母辛規(guī)格  Peimisine

RatCholecystokinin,CCKELISA試劑盒大鼠膽囊收縮素/腸促胰酶肽(CCK)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T  23496-41-5貝母素甲  Peimine

小鼠組織蛋白酶A(CTSA)ELISA試劑盒 ,英文名: CTSA ELISA Kit  18059-10-4貝母素乙說明書  Peiminine

山羊促生長激素釋放激素(GHRH)ELISA檢測試劑盒Goatgrowthhormonereleasinghormone,GHRHELISAKit 96T/48T  18513-76-3檳榔堿品牌  Arecoline

88206-46-6羌活醇說明書  Notopterol    組織半胱氨酸蛋白酶-5(CASPASE-5)活性熒光定量檢測試劑盒20

88182-33-6歐當歸內(nèi)酯A規(guī)格  Levistilide A   組織半胱氨酸蛋白酶-4(CASPASE-4)活性熒光定量檢測試劑盒20

88182-33-6歐當歸內(nèi)酯A規(guī)格  Levistilide A   組織半胱氨酸蛋白酶-2(CASPASE-2)活性比色法定量檢測試劑盒20

88105-29-7三七皂苷Fe說明書  Notoginsenoside Fe  組織半胱氨酸蛋白酶-13(CASPASE-13)活性熒光定量檢測試劑盒20

DH10B 感受態(tài)細胞87-99-0木糖醇  Xylitol  組織半胱氨酸蛋白酶-13(CASPASE-13)活性比色法定量檢測試劑盒20

操作方法:

1. DH5α感受態(tài)細胞從-80℃拿出,迅速插入冰中,5分鐘后待菌塊融化,加入目的DNA(質(zhì)?;蜻B接產(chǎn)物)并用手撥打EP管底輕輕混勻(避免用槍吸打),冰中靜置25分鐘。
2. 42℃水浴熱激45秒,迅速放回冰中并靜置2分鐘,晃動會降低轉(zhuǎn)化效率。
3. 向離心管中加入700 μl不含抗生素的無菌培養(yǎng)基 (2YT或LB),混勻后37℃,200 rpm復(fù)蘇60分鐘。
4. 5000 rpm離心一分鐘收菌,留取100 μl左右上清輕輕吹打重懸菌塊并涂布到含相應(yīng)抗生素的2YT或LB培養(yǎng)基上。

5.將平板倒置放于37℃培養(yǎng)箱過夜培養(yǎng)。如果進行藍白斑篩選操作,將平板放37℃培養(yǎng)至少15小時。

聯(lián)系方式
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