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上海帛科生物技術(shù)有限公司
   
     
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Tuner(DE3)pLysS 感受態(tài)細(xì)胞
起訂量 (瓶)價(jià)格
1-10￥2350 /瓶
≥10￥1250 /瓶
  • 品牌：帛科
  • 產(chǎn)地：進(jìn)口、國(guó)產(chǎn)
  • 貨號(hào)：BK-G63287
  • 發(fā)布日期： 2021-02-21
  • 更新日期： 2024-12-26
產(chǎn)品詳請(qǐng)
產(chǎn)地 進(jìn)口、國(guó)產(chǎn)
保存條件 低溫冷藏
品牌 帛科
貨號(hào) BK-G63287
用途 產(chǎn)品僅用于科研
組織來(lái)源 詳見(jiàn)說(shuō)明書(shū)
細(xì)胞形態(tài) 詳見(jiàn)說(shuō)明書(shū)
是否是腫瘤細(xì)胞 否
CAS編號(hào)
保質(zhì)期 詳見(jiàn)說(shuō)明書(shū)
器官來(lái)源 詳見(jiàn)說(shuō)明書(shū)
免疫類型 詳見(jiàn)說(shuō)明書(shū)
品系 詳見(jiàn)說(shuō)明書(shū)
生長(zhǎng)狀態(tài) 詳見(jiàn)說(shuō)明書(shū)
物種來(lái)源 詳見(jiàn)說(shuō)明書(shū)
包裝規(guī)格 100ul*10 100ul*50
純度 %
是否進(jìn)口 是

細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程：

一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：
1）準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO，貨號(hào)21875-091)，90%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%。
2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配，液氮儲(chǔ)存。
二．細(xì)胞處理：
1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過(guò)夜。*天換液并檢查細(xì)胞密度。
2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對(duì)于懸浮細(xì)胞，傳代可參考以下方法：
方法一：收集細(xì)胞，1000RPM，常溫條件下離心5分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

規(guī)格參數(shù)：

產(chǎn)品名稱：Tuner(DE3)pLysS 感受態(tài)細(xì)胞
規(guī)格 ：100ul*10 100ul*50
分類：表達(dá)感受態(tài)細(xì)胞
用途：生化試劑（用于科研試驗(yàn)研究）
儲(chǔ)存條件: -70℃保存，必須加干冰運(yùn)輸。自收貨之日起液氮保存至少一年，-70℃保存至少6個(gè)月。
外觀:（性狀） 干冰運(yùn)輸，單加10kg干冰費(fèi)
單位: 袋

注意事項(xiàng)：


1. 感受態(tài)細(xì)胞*在冰中緩慢融化，插入冰中8分鐘內(nèi)加入目標(biāo)DNA，不可在冰中放置時(shí)間過(guò)長(zhǎng)，長(zhǎng)時(shí)間存放會(huì)降低轉(zhuǎn)化效率。
2. 混入質(zhì)?；蜻B接產(chǎn)物時(shí)應(yīng)輕柔操作。
3. 轉(zhuǎn)化高濃度的質(zhì)?；蚋咝实倪B接產(chǎn)物可相應(yīng)減少最終用于涂板的菌量。
同一批感受態(tài)細(xì)胞，用含目的片段的T載體質(zhì)粒轉(zhuǎn)化（陽(yáng)性對(duì)照）能長(zhǎng)出密密麻麻的菌落，而用另一種載體和目的片段的連接產(chǎn)物轉(zhuǎn)化，卻一個(gè)菌都沒(méi)長(zhǎng)出來(lái)，重復(fù)了三次都這樣。請(qǐng)問(wèn)這是感受態(tài)細(xì)胞的制作不過(guò)關(guān)，還是連接出了問(wèn)題？哪個(gè)可能性大些？
答：應(yīng)該是連接的問(wèn)題。所有連接反應(yīng)建議同時(shí)轉(zhuǎn)化酶切后的質(zhì)粒作為另一個(gè)陰性對(duì)照，確定酶切是否完全。同時(shí)連接前請(qǐng)確定質(zhì)粒和片段濃度達(dá)到最小連接量的要求。
感受態(tài)細(xì)胞放到-80冰箱了有半年了，還能用來(lái)轉(zhuǎn)化質(zhì)粒嗎？
答：如-80冰箱儲(chǔ)存過(guò)程中沒(méi)有發(fā)生凍融的情況，是可以用來(lái)轉(zhuǎn)化的，但是由于凍存時(shí)間過(guò)長(zhǎng)，轉(zhuǎn)化效率會(huì)有所下降，如果用于普通的質(zhì)粒重轉(zhuǎn)或TA克隆等高效連接體系也是可以的，如珍貴的樣品請(qǐng)選用較為新鮮的感受態(tài)細(xì)胞。

長(zhǎng)春西?。?biāo)準(zhǔn)品）質(zhì)量規(guī)格：含量測(cè)定Vinpocetine  英文名稱RatCD23ELISAKit大鼠CD23規(guī)格：96T/48T  大鼠胰蛋白酶原激活肽(TAP)ELISA試劑盒 ，英文名： TAP ELISA Kit

枸櫞酸鉍雷尼替丁（標(biāo)準(zhǔn)品）質(zhì)量規(guī)格：供檢查用Ranitidine bismuth   可溶性植物葉綠體總蛋白制備試劑盒20  人抗腎上腺皮質(zhì)抗體(AAA)ELISA檢測(cè)試劑盒HumanAi-adrenocoicalaibody,AAAELISAKit 96T/48T

丹曲林鈉（標(biāo)準(zhǔn)品）質(zhì)量規(guī)格：含量測(cè)定Dantrolene  hemiheptahydrate  ELISAKitSMM人平滑肌肌球蛋白規(guī)格：48T/96T  大鼠α2巨球蛋白(α2-MG)試劑盒 Rat α2 macroglobulin,α2 MG ELISA Kit

呱西替柳（標(biāo)準(zhǔn)品）質(zhì)量規(guī)格：含量測(cè)定Guacetisal  小鼠α1酸性糖蛋白(α1-AGP)ELISA試劑盒 ，英文名： α1-AGP ELISA Kit  CLIAKitforST1(HumanSomelysin-1)ELISAKit人基質(zhì)裂解素規(guī)格：48T/96T

RabbitVascuolarcelladhesionmolecule1,VCAM-1ELISAKit兔內(nèi)皮細(xì)胞粘附分子1(VCAM-1/CD106)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T  28649-60-7環(huán)氧續(xù)隨子醇品牌  Epoxylathyrol  

載玻片細(xì)胞IGF蛋白表達(dá)NBT顯色光學(xué)顯微鏡檢測(cè)試劑盒10/20  6873-13-8黃柏堿規(guī)格  Phellodendrine

Humanβ-siteAPP-CleavingEnzyme1，1BACE1ELISA試劑盒人β位淀粉樣前體蛋白裂解酶1(BACE1)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T  751-03-1黃柏酮  Obacunone

小鼠轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β1(TGF-β1)ELISA試劑盒 ，英文名： TGF-β1 ELISA Kit  40246-10-4黃豆黃苷說(shuō)明書(shū)  Glycitin

小鼠糖原1酸化酶同工酶BB(GP-BB)ELISA檢測(cè)試劑盒MouseGlycogenphosphorylaseBB,GP-BBELISAKit 96T/48T  40957-83-3黃豆黃素品牌  Glycitein

57-87-4甾醇  Ergosterol   豬樣生長(zhǎng)因子結(jié)合蛋白3(IGFBP-3)試劑盒 Porcine IGFBP-3 ELISA Kit

578-74-5芹菜素-7-O-β-D-吡喃葡萄糖苷品牌  Apigenin-7-O-β-D-glucopyranoside   豬樣生長(zhǎng)因子結(jié)合蛋白3(IGFBP-3)ELISA檢測(cè)試劑盒Porcineinsulin-likegrowthfactorsbindingprotein3,IGFBP-3ELISAKit 96T/48T

57817-89-7甜菊苷  Stevioside  豬樣生長(zhǎng)因子結(jié)合蛋白1(IGFBP-1)試劑盒 Pig insulin-like growth factors binding protein 1,IGFBP-1 ELISA Kit

574-84-5秦皮素  Fraxetin  豬樣生長(zhǎng)因子2(IGF-2)試劑盒 Porcine insulin-like growth factors 2,IGF-2 ELISA Kit

57420-46-9胡麻屬苷品牌  Sesamoside   豬樣生長(zhǎng)因子2(IGF-2)ELISA檢測(cè)試劑盒Porcineinsulin-likegrowthfactors2,IGF-2ELISAKit 96T/48T

Tuner(DE3)pLysS 感受態(tài)細(xì)胞操作方法：

1. DH5α感受態(tài)細(xì)胞從-80℃拿出，迅速插入冰中，5分鐘后待菌塊融化，加入目的DNA（質(zhì)粒或連接產(chǎn)物）并用手撥打EP管底輕輕混勻(避免用槍吸打)，冰中靜置25分鐘。
2. 42℃水浴熱激45秒，迅速放回冰中并靜置2分鐘，晃動(dòng)會(huì)降低轉(zhuǎn)化效率。
3. 向離心管中加入700 μl不含抗生素的無(wú)菌培養(yǎng)基 (2YT或LB)，混勻后37℃，200 rpm復(fù)蘇60分鐘。
4. 5000 rpm離心一分鐘收菌，留取100 μl左右上清輕輕吹打重懸菌塊并涂布到含相應(yīng)抗生素的2YT或LB培養(yǎng)基上。

5.將平板倒置放于37℃培養(yǎng)箱過(guò)夜培養(yǎng)。如果進(jìn)行藍(lán)白斑篩選操作，將平板放37℃培養(yǎng)至少15小時(shí)。

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