|
| 產(chǎn)地 | 國(guó)產(chǎn) |
| 品牌 | 帛科 |
| 貨號(hào) | BK-S01321 |
| 用途 | 僅供科研使用 |
| 英文名稱 | |
| 包裝規(guī)格 | 100管/48樣 |
| 純度 | % |
| CAS編號(hào) | |
| 別名 | 輔酶ⅠNAD(H)含量測(cè)試盒 |
| 分子式 | |
| 是否進(jìn)口 | 否 |
基本信息：
|
產(chǎn)品名稱 |
檢測(cè)方法 |
規(guī)格 |
貨號(hào) |
|
輔酶ⅠNAD(H)含量測(cè)試盒微量法 |
微量法 |
100管/48樣 |
BK-S01321 |
大鼠透明質(zhì)酸結(jié)合蛋白(HABP)elisa檢測(cè)試劑盒
大鼠透明質(zhì)酸(HA)elisa檢測(cè)試劑盒
大鼠銅藍(lán)蛋白(CP)elisa檢測(cè)試劑盒
大鼠同型半胱氨酸(Hcy)elisa檢測(cè)試劑盒
大鼠鐵蛋白(Ferritin)elisa檢測(cè)試劑盒
商品介紹：
|
測(cè)定意義 輔酶ⅠNAD(H)廣泛存在于動(dòng)物、植物、微生物和培養(yǎng)細(xì)胞中，NAD+是糖酵解（EMP）和三羧酸循環(huán)（TCA）的主要?dú)涫荏w，生成的NADH經(jīng)呼吸電子鏈（ETC）傳遞把電子交給氧，在合成ATP的同時(shí)，形成大量的ROS，同時(shí)NADH再生為NAD+。糖、脂、蛋白質(zhì)三大代謝物質(zhì)分解中的氧化反應(yīng)絕大部分通過(guò)這一體系完成。NAD(H)含量和NADH/NAD+比值的高低可用于評(píng)價(jià)糖酵解和TCA循環(huán)的強(qiáng)弱。較高的NAD(H)及NADH/NAD+比值說(shuō)明細(xì)胞呼吸耗氧量較高，處于過(guò)氧化狀態(tài)。此外，NADH/NAD+比值升高也可抑制糖酵解和TCA循環(huán)。另外，NAD+降解產(chǎn)物對(duì)細(xì)胞信號(hào)傳導(dǎo)、代謝和基因表達(dá)等具有重要的調(diào)控作用。 測(cè)定原理 分別用酸性和堿性提取液提取樣品中NAD+和NADH，NADH通過(guò)PMS的遞氫作用，還原氧化型噻唑藍(lán)（MTT）為甲瓚，在570nm下檢測(cè)吸光值；而NAD+可被乙醇脫氫酶還原為NADH，進(jìn)一步采用MTT還原法檢測(cè)。 需自備的儀器和用品 可見(jiàn)分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、臺(tái)式離心機(jī)、移液器、微量石英比色皿/96孔板、研缽、冰和蒸餾水。 |
特點(diǎn):
(1)應(yīng)用廣泛
由于各種各樣的無(wú)機(jī)物和有機(jī)物在紫外可見(jiàn)區(qū)都有吸收,因此均可借此法加以測(cè)定。到目前為止,幾乎化學(xué)元素周期表上的所有元素(除少數(shù)放射性元素和惰性元素之外)均可采用此法。
(2)靈敏度高
由于相應(yīng)學(xué)科的發(fā)展,使新的有機(jī)顯色劑的合成和研究取得可喜的進(jìn)展,從而對(duì)元素測(cè)定的靈敏度大大提高了一步。特別是由于多元絡(luò)合物和各種表面活性劑的應(yīng)用研究,使許多元素的摩爾吸光系數(shù)由原來(lái)的幾萬(wàn)提高到幾十萬(wàn)。相對(duì)于其它痕量分析方法而言,光度法的精密度和準(zhǔn)確度一致公認(rèn)是比較高的。不但在實(shí)際工作中光度法被廣泛采用,在標(biāo)準(zhǔn)參考物質(zhì)的研制中,它更受重視,很多光度分析法已制定成為標(biāo)準(zhǔn)方法。
(3)選擇性好
目前已有些元素只要利用控制適當(dāng)?shù)娘@色條件就可直接進(jìn)行光度法測(cè)定,如鈷、鈾、鎳、銅、銀、鐵等元素的測(cè)定,已有比較滿意的方法了。
(4)準(zhǔn)確度高
對(duì)于一般的分光光度法來(lái)說(shuō),其濃度測(cè)量的相對(duì)誤差在1-3%范圍內(nèi),如采用示差分光度法測(cè)量,則誤差往往可減少到千分之幾。
(5)適用濃度范圍廣
可從常量(1-50%)(尤其是使用示差法)到痕量(10-6-10-8%)(經(jīng)預(yù)富集后)。
(6)分析成本低、操作簡(jiǎn)便、快速
實(shí)驗(yàn)方法學(xué)：
一、肝素的配制：
市售肝素凍干粉140單位/mg，1克瓶裝，每瓶140，000單位，稱取0.1克肝素凍干粉，加生理鹽水5ml，配成2800單位/ml。取50～100μl濕潤(rùn)管壁，可抗凝人血3～5ml，血液不會(huì)凝固。老鼠血易凝固，所以 更濃一些?？梢匀?.1克肝素凍干粉，加3ml生理鹽水溶解后，取50～100μl,可抗凝鼠血2～4ml。
肝素抗凝管的制備：取0.1克肝素凍干粉，加2.5ml生理鹽水。取100μl～150μl滴入塑料或玻璃管中，濕潤(rùn)管壁，低于80℃小烤箱中（可以用烤面包的小烤箱），橫向轉(zhuǎn)動(dòng)，每隔5～10分鐘轉(zhuǎn)動(dòng)一次，直至干燥后放入4℃保存，可使2～5ml血液不凝固。
二、血液樣本的收集：
全血根據(jù)收集的條件，分成不抗凝和抗凝兩種。同時(shí)，不抗凝分離出的上層黃色的液體我們稱之為血清；抗凝分離出的上層黃色的液體我們稱之為血漿。
1、不抗凝收集血清:將收集好的全血,靜置1～2小時(shí)，直接低速離心分離出血清待用或保存。
2、抗凝收集血漿: 收集抗凝全血，輕輕顛倒充分抗凝后，可直接低速離心分離血漿(也可靜置半小時(shí)左右再低速離心分離血漿)待用或保存。根據(jù)不同抗凝劑的性能特征，選擇合適的抗凝劑。實(shí)驗(yàn)室常用的抗凝劑有肝素的各種鹽、EDTA及枸櫞酸鈉。
選擇抗凝的注意點(diǎn)：
①、每一份樣本所加的抗凝劑的量要一致，同時(shí)所取的全血的量也要盡量一致;
②、收集抗凝全血后一定要輕輕顛倒，充分抗凝，防止部分血液未接觸到抗凝劑而導(dǎo)致凝固;
③、抗凝全血收集的血漿相對(duì)較多（1ml抗凝全血能分離出0.4～0.5ml血漿）;
④、抗凝收集的血漿冷凍保存后，解凍時(shí)可能會(huì)出現(xiàn)絮狀渾濁，如有則需要離心去掉渾濁后
用于測(cè)定。
ANTXR2 炭疽毒素受體2抗體
ATG4C 自噬相關(guān)蛋白4C抗體
APG5L 自噬蛋白5/細(xì)胞凋亡的特異性蛋白抗體
ARSA 芳基硫酸酯酶A抗體
ACA11 擬南芥ACA11抗體
AHA3 AHA3抗體（擬南芥）
Phospho-ATP1A1 (Ser23) 磷酸化鈉鉀ATP酶蛋白a1抗體
phospho-ASK1 (Ser83) 磷酸化細(xì)胞凋亡信號(hào)調(diào)節(jié)激酶1抗體
AADACL1 中性膽固醇酯水解酶1抗體
Astrocyte 人星形膠質(zhì)細(xì)胞抗體
Aldolase A 醛縮酶A抗體
Annexin VI 膜粘連蛋白6抗體
beta-Amyloid(25-35) β淀粉樣肽（25-35）抗體
Angiotensin I 緊張素I抗體
Adrenomedullin 腎上腺髓質(zhì)素抗體(N端20肽)
Arfaptin 2 ADP核糖基化因子結(jié)合蛋白2抗體
AVPR2 精氨酸加壓素受體2抗體
ASC 凋亡相關(guān)斑點(diǎn)樣蛋白ASC抗體
Afadin 絲狀肌動(dòng)蛋白結(jié)合蛋白抗體
Antithrombin III 抗凝血酶3抗體
人胚；WI-38 [WI38]
人臍內(nèi)皮細(xì)胞（人細(xì)胞污染）；ECV-304 [ECV304；ECV 304]
人胚；MRC-5
人羊膜細(xì)胞；WISH
人二倍體細(xì)胞；HEL
人正常肝細(xì)胞；L-02
人胚肺細(xì)胞VA13細(xì)胞；WI-38 VA13亞系2RA
人胚肺二倍體細(xì)胞；HL
人腎皮質(zhì)近曲小管上皮細(xì)胞；HK-2
人臍內(nèi)皮細(xì)胞；HUV-EC-C
人男性正常細(xì)胞；Hs68
人胚腎上皮細(xì)胞系；KiMA
人胚肺細(xì)胞系；KuMA
人永生化淋巴細(xì)胞；CNLMG-B5537LC
人類成纖維細(xì)胞系；CNLMG-B5537SKIN
人永生化淋巴細(xì)胞；CNLMG-B5538LC
人類成纖維細(xì)胞系；CNLMG-B5538SKIN
人肺轉(zhuǎn)化細(xì)胞；AE1201
人胚；MRC-5
人胚肺二倍體細(xì)胞；HEL-1
人胚腎二倍體細(xì)胞；HEK-2
人胚肺二倍體細(xì)胞；KMB-17
人胚肺二倍體細(xì)胞；HEL-2
輔酶ⅠNAD(H)含量測(cè)試盒微量法人胚胎皮膚成纖維細(xì)胞；HES
人皮膚成纖維細(xì)胞；HSAS4
人皮膚成纖維樣細(xì)胞；HSF2
人胚胎成纖維樣細(xì)胞；HEH2
操作步驟:
實(shí)驗(yàn)開(kāi)始前，各試劑均應(yīng)平衡至室溫（試劑不能直接在37℃溶解）；試劑或樣品稀釋時(shí)，均需混勻，混勻時(shí)盡量避免起泡。實(shí)驗(yàn)前應(yīng)預(yù)測(cè)樣品含量，如樣品濃度過(guò)高時(shí)，應(yīng)對(duì)樣品進(jìn)行稀釋，以使稀釋后的樣品符合試劑盒的檢測(cè)范圍，計(jì)算時(shí)再乘以相應(yīng)的稀釋倍數(shù)。
1. 加樣：分別設(shè)空白孔、標(biāo)準(zhǔn)孔、待測(cè)樣品孔?？瞻卓准訕悠废♂屢?00μl，余孔分別加標(biāo)準(zhǔn)品或待測(cè)樣品100μl，注意不要有氣泡，加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動(dòng)混勻，酶標(biāo)板加上蓋或覆膜，37℃反應(yīng)120分鐘。為保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果有效性，每次實(shí)驗(yàn)請(qǐng)使用新的標(biāo)準(zhǔn)品溶液。
2. 棄去液體，甩干，不用洗滌。每孔加檢測(cè)溶液A工作液 100μl（在使用前一小時(shí)內(nèi)配制），酶標(biāo)板加上覆膜, 37℃反應(yīng)60分鐘。
3. 溫育60分鐘后，棄去孔內(nèi)液體，甩干，洗板3次，每次浸泡1-2分鐘，大約400μl/每孔，甩干（也可輕拍將孔內(nèi)液體拍干）。
4. 每孔加檢測(cè)溶液B工作液（同檢測(cè)A工作液） 100μl，酶標(biāo)板加上覆膜37℃反應(yīng)60分鐘。
5. 溫育60分鐘后，棄去孔內(nèi)液體，甩干，洗板5次，每次浸泡1-2分鐘，350μl/每孔，甩干（也可輕拍將孔內(nèi)液體拍干）。
6. 依序每孔加底物溶液90μl，酶標(biāo)板加上覆膜37℃避光顯色（30分鐘內(nèi)，此時(shí)肉眼可見(jiàn)標(biāo)準(zhǔn)品的前3-4孔有明顯的梯度蘭色，后3-4孔梯度不明顯，即可終止）。
7. 依序每孔加終止溶液50μl，終止反應(yīng)，此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色。終止液的加入順序應(yīng)盡量與底物液的加入順序相同。為了保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性，底物反應(yīng)時(shí)間到后應(yīng)盡快加入終止液。
8. 用酶聯(lián)儀在450nm波長(zhǎng)依序測(cè)量各孔的光密度（OD值）。
