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NS0 殘留 DNA 檢測試劑盒

(PCR-熒光探針法)

NS0 殘留DNA 檢測試劑盒是用于定量檢測各種生物制品及藥品的中間品、半成品和成 品中殘留的 NS0 宿主細胞殘留 DNA。

本試劑盒利用 Taqman 探針法，定量檢測樣本中NS0 殘留 DNA 。該方法具有速度快、 特異性高、  性能可靠且 檢測限可達到 fg 級別。

試劑盒組份：

規(guī)格 ：100  反應(yīng)

適用機型：

PRISM 7500 Real-Time PCR System (ABI)

StepOne Plus Real-Time PCR System (ABI)

LightCycler 480 (Roche)

AriaMX (Agilent Technologies)

CFX (BIO-RAD)

NS0 殘留 DNA 檢測試劑盒實驗操作過程：

一、 NS0 DNA 定量參考品的稀釋及標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備

用試劑盒中提供的 DNA dilution buffer 將 NS0 control DNA 進行梯度稀釋，稀釋濃度依 次為 300pg/ul 、30pg/ul 、3pg/ul 、300fg/ul 、30fg/ul 、  3fg/ul。具體操作如下：           1.將試劑盒中的 NS0 control DNA 和 DNA dilution buffer 置于冰上融化，待完全融化后，輕微振蕩混勻，簡短快速離心。

2.取 6 支干凈的 1.5ml 離心管，分別標(biāo)記為 SD1 ，SD2 ，SD3 ，SD4 ，SD5 ，SD6。

3 ，SD1 管中加入 198ul DNA dilution buffer，其余管中分別加入 180ul DNA dilution buffer。 4,取 2ul NS0 control DNA 加入 SD1 管中，  然后渦旋振蕩混勻 5- 10S 后短時快速離心 5S，渦 旋振蕩和快速離心各重復(fù) 3 次。

5,按表 2 依次進行 6 次梯度稀釋操作，稀釋操作同步驟 4。

表 2. NS0 control DNA 的稀釋

qPCR 結(jié)果分析(以 ABI 7500 為例)

1.在 Results 的 Amplification  plot 面板中， 將 Threshold 設(shè)置為 0.05 ，點擊 Analyze，此時可 初步查看擴增曲線的形態(tài)是否正常。

2.在 Results 的 Plate 面板中，將標(biāo)準(zhǔn)曲線孔的 Task 一欄設(shè)置為 Standard，并且在 Quantity 一欄分別賦值為 3000 、300 、30 、3 、0.3 、0.03 (含義為每孔的 DNA 量， 單位為 pg)， 并且 在相應(yīng) 的 Sample Name 一欄命名為 SD1 、SD2 、SD3 、SD4 、SD5 、SD6。

3.在 Results 的 Plate 面板中，將無模板對照 NTC 孔的 Task 一欄設(shè)置為 NTC，將陰性質(zhì)控NEG 孔、待測樣本孔、樣本 ERC 孔的 Task 一欄設(shè)置為 Unknown，并且在相應(yīng)的 Sample Name 一欄中命名為 NTC 、NEG 、S 、ERC ，之后點擊開始鍵。

4.在 Results 的 Standard Curve  面板中，可讀取標(biāo)準(zhǔn)曲線的斜率(Slope)、截距(Intercept)、R²

5.在 Results 的 Report 面板中， Mean Quantity 一欄可讀取無末班對照 NTC、陰性質(zhì)控 NEG、 待測樣本、樣本 ERC 的檢測值。后續(xù)可在檢測報告中將單位換算為 pg/ml  樣本。

注:根據(jù)待測樣本和樣本 ERC 的檢測結(jié)果計算加樣回收率，加樣回收率要求在 50%- 150%之 間。